人脈絡(luò)膜血管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

    1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將組織剪成1mm3左右大小；

    2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

    3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

    4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

    5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

    1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

    2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

    4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

    5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

    6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

白果內(nèi)酯

白花前胡丙素

白花前胡醇

白花前胡甲素

白樺脂醇

白樺脂醛

白樺脂酸

白蠟樹素

白藜蘆醇

白綿馬素AA

白綿馬素AP

白屈菜紅堿

白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ

白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ

白術(shù)內(nèi)酯III

白頭翁皂苷B4

白鮮堿

白楊素

百秋李醇

百蕊草素I

斑蝥素

D-半乳糖

寶藿苷I

貝母素甲

貝母素乙

貝母辛

L-苯丙氨酸

苯甲酰次烏頭原堿

苯甲酰芍藥苷

苯甲酰烏頭原堿

苯甲酰新烏頭原堿