在大多數(shù)情況下,將基因轉(zhuǎn)染進入有絲分裂后期的神經(jīng)細胞(如原核腦皮層核海馬趾神經(jīng)細胞)被證實是無效的。其他轉(zhuǎn)染方法如磷脂鈣/DNA共沉淀法、陽離子脂質(zhì)體法或顯微注射法等對神經(jīng)細胞都是有毒的,他們通常導致被轉(zhuǎn)染的細胞存活率不到10,。經(jīng)改良后的病毒轉(zhuǎn)染法,如腺病毒核Semilki forest病毒具有較高的轉(zhuǎn)染率,單病毒載體的構(gòu)建是耗時的、并且伴有不安全的擔憂,病毒感染有可能感染蛋白質(zhì)的合成,更有甚者,由于病毒轉(zhuǎn)導后蛋白表達的水平太高。
基因電轉(zhuǎn)染儀技術(shù)由兩部分組成:
1.轉(zhuǎn)染過程中,細胞首先懸浮在轉(zhuǎn)染試劑中,選擇相應的轉(zhuǎn)染程序,僅需數(shù)秒鐘,轉(zhuǎn)染結(jié)束,將細胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基中培養(yǎng)、觀察。針對不同的轉(zhuǎn)染細胞都有相應的轉(zhuǎn)染試劑,配合相應Amaxa轉(zhuǎn)染儀的程序,使DNA直接轉(zhuǎn)入細胞核內(nèi),轉(zhuǎn)染效率高,易操作,實驗周期短。
2.原理是基于細胞特異性的細胞核轉(zhuǎn)染液和電穿孔技術(shù)的結(jié)合。
細胞特異性的細胞核轉(zhuǎn)染液為外源基因進入細胞核提供友好界面,降低轉(zhuǎn)染過程對細胞的損傷。轉(zhuǎn)染技術(shù)有一般的電穿孔無法對比地優(yōu)點,它具有電子參數(shù),每一套電子參數(shù)是作為一種程序去適應不同的細胞類型。由于電子參數(shù)是預先精心設(shè)計好的,因此操作者不用進行電子參數(shù)的優(yōu)化、轉(zhuǎn)染條件的摸索等繁瑣的工作,您只需按動按鈕選用規(guī)定的程序即可。
基因電轉(zhuǎn)染儀的相關(guān)知識小編就分享到這里,看完本文您就應該有了基本的認識和了解相信大家都明白了吧!總的來說,希望對大家有所幫助。請持續(xù)關(guān)注本網(wǎng)站哦!
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