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CCK8 檢測(cè)耐藥細(xì)胞株耐藥株 PC9R 吉非替尼藥物的耐藥作用

來(lái)源：上海雅吉生物科技有限公司 2022年10月27日 09:17

細(xì)胞：PC9R、PC9

藥物：吉非替尼

儀器與試劑：CCK8 試劑日本同仁；

分光光度計(jì) TECAN

實(shí)驗(yàn)過(guò)程：

一：細(xì)胞培養(yǎng)

PC9R 和 PC9 均采用含 10％胎牛血清，1%雙抗（青鏈霉素混合液）的 DMEM 培養(yǎng)基，置于 37℃，5% CO2 的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。

二、吉非替尼藥物貯藏液的配置

向已稱(chēng)好樣本重量的 EP 管中直接加入 DMSO 稀釋成 50mmol/L 的濃度，使用再稀釋弄所需的使用濃度。

三、CCK8 試驗(yàn)

1. 在 96 孔板中配制 100 ul 的細(xì)胞懸液（2000–3000 cells/孔）。將培養(yǎng)板在培養(yǎng) 箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時(shí) ( 在 37℃， 5% CO2 的條件下 )。

2. 向培養(yǎng)板加入 10 ul 八個(gè)濃度（0.390625uM, 0.78125uM, 1.565uM, 3.125 uM ,6.25 uM, 12.5 uM, 25uM, 50 uM）的待測(cè)藥物。

3. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育 24 小時(shí)。

4. 向每孔加入 10 ul CCK-8 溶液 (注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響 O.D 值的讀數(shù)，斜著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基液面下加) 。加入后輕輕振搖培養(yǎng)板。

5. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時(shí)。

6. 用酶標(biāo)儀測(cè)定在 450 nm 處的吸光度。

四、 IC50 結(jié)果計(jì)算

1、儀器導(dǎo)出原始數(shù)據(jù)

吸光度檢測(cè)	通道	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
檢測(cè)波長(zhǎng)	A
450 nm	B		1.001	0.881	0.915	0.686	1.951	1.422	1.315	1.314	1.209	2.044
	C		1.226	1.254	1.166	0.581	2.273	1.503	1.478	1.508	1.112	1.973
檢測(cè)日期	D		1.57	1.544	1.543	0.522	1.929	1.661	1.803	1.743	1.143	2.145
2019/8/1	E		1.691	1.787	1.717	0.487	0.239	1.943	1.858	1.796	0.93	0.232
	F		1.811	1.769	1.838	0.399	0.234	1.941	1.859	1.896	0.857	0.244
檢測(cè)時(shí)間	G		2.094	1.838	1.905	0.525	0.25	2.077	1.903	1.963	0.851	0.232
16:07:31	H

加樣備注：

PCR

PC9R

12.5uM

25uM

0uM

12.5uM

25uM

0uM

6.25uM

25uM

0uM

6.25uM

25uM

0uM

3.125uM

25uM

0uM

3.125uM

25uM

0uM

1.5625uM

50uM

空白

1.5625uM

50uM

空白

0.78125uM

50uM

空白

0.78125uM

50uM

空白

0.390625uM

50uM

空白

0.390625uM

50uM

空白

2、計(jì)算結(jié)果

親本株	濃度(uM)	50	25	12.5	6.25	3.125	1.5625	0.78125	0.390625
	抑制百分比 (%)	87.32965	80.36832	61.80479	46.16943	27.55064	17.64273	13.53591	5.819521
耐藥株	濃度(uM)	50	25	12.5	6.25	3.125	1.5625	0.78125	0.390625
	抑制百分比 (%)	64.61313	49.46828	38.70554	30.67473	17.51008	10.35937	8.544188	4.015402

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