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關于RNA提取時RNA降解的原因

來源:上海遠慕生物科技有限公司   2022年10月31日 13:39  

  1 ) 新鮮細胞:

  裂解液的量不足,使得裂解不充分。

  2 ) 新鮮組織:

  某些含有內(nèi)源性核酸酶的樣品,很難避免RNA酶的降解,建議采用的方法為在液氮條件下將組織研碎,并且,勻漿時采用更多的裂解液。

  3 ) 冷凍樣品:

  樣品取材后應該迅速置于液氮中冷凍存放,然后轉(zhuǎn)移到-70℃冰箱存放。如果未經(jīng)液氮速冷直接轉(zhuǎn)移到-70℃冰箱存放,會造成RNA緩慢降解。樣品研磨后,在液氮剛剛揮發(fā)完時,將樣品迅速轉(zhuǎn)移到含裂解液的容器中,立即混勻勻漿。

  4 ) 外源 RNA 酶的污染:

  試劑、器械等實驗用品應該采用DEPC 水滅菌處理。

  5 ) 內(nèi)源 RNA 酶的污染:

  抑制劑失效或者用量不夠,實驗樣品過多或者勻漿溫度過高。

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