用于免疫熒光染色的染料需具備以下幾個條件:
熒光染料應(yīng)有較高的量子產(chǎn)額和消光系數(shù);
熒光染料對488nm的激發(fā)光波長有較強的吸收;
發(fā)射光波長與激發(fā)光波長之間應(yīng)有較大的波長差;
容易與被標(biāo)記的單克隆抗體結(jié)合而不影響抗體自身的特異性。
1.異硫氰酸熒光素(FITC):可產(chǎn)生亮綠色熒光。FITC是免疫熒光標(biāo)記最/常用的熒光探針。
2.德州紅:與生物素偶聯(lián)的抗體有很強的親和力,產(chǎn)生紅色熒光。
3.藻膽蛋白類:主要包括藻紅蛋白(PE)、藻青蛋白(PC)、別藻青蛋白(APC)三類。多發(fā)生橙色至紅色熒光。
4.能量傳遞復(fù)合染料
免疫熒光用什么封閉比較好?
可以使用無蛋白封閉液 PW040 PW041 PW042,
血清封閉:組織切片上有剩余的位點可以與一抗非特異性結(jié)合,造成后續(xù)結(jié)果的假陽性;封閉血清一般是和二抗同一來源的,血清中動物自身的抗體,預(yù)先能和組織中有交叉反應(yīng)的位點發(fā)生結(jié)合;也可以用小牛血清、BSA、羊血清等,但不能與一抗來源一致。
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