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PCR，是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于擴(kuò)增特定的DNA片段，這種方法可在生物體外進(jìn)行，不必依賴大腸桿菌或酵母菌等生物體。PCR這項(xiàng)技術(shù)，被廣泛地運(yùn)用在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)室。
熒光PCR擴(kuò)增儀是分子診斷實(shí)驗(yàn)室的重要工具，直接影響臨床檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、甚至工作效率。熒光PCR儀器品牌的選擇，是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
依據(jù)PCR儀工作原理選擇機(jī)型
熱模塊：
由于PCR擴(kuò)增儀器為96個(gè)樣本同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增和檢測(cè)，每個(gè)檢測(cè)孔的溫控一致是理想狀態(tài)。不同PCR擴(kuò)增儀的升降溫原理不同，如壓縮機(jī)、半導(dǎo)體或空氣傳導(dǎo)，升降溫速度差異較大。有的PCR儀器由多個(gè)加熱模塊拼接，長期使用后容易出現(xiàn)某一個(gè)加熱模塊損壞，給臨床報(bào)告帶來麻煩。臨床檢測(cè)不單單有質(zhì)量要求，有時(shí)容不得報(bào)告的拖延，因此選擇整體加熱模塊和故障率的儀器，也是提升實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量的因素之一。
光學(xué)模塊：
PCR擴(kuò)增信號(hào)的采集，是熒光PCR儀器定量的靈魂，決定了96個(gè)樣本孔間信號(hào)采集的均一性。從擴(kuò)增管上部采集熒光信號(hào)的方式，由于經(jīng)過管蓋和空氣部分，容易導(dǎo)致熒光信號(hào)衰減或折射，不同核酸濃度的擴(kuò)增效率易產(chǎn)生差異，而側(cè)面采集熒光信號(hào)儀器，則能有效避免上部熒光采集存在的缺陷，獲得顏值較高的擴(kuò)增曲線。
軟件系統(tǒng)
計(jì)算機(jī)對(duì)每個(gè)擴(kuò)增熒光信號(hào)進(jìn)行擬合，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出檢測(cè)樣本的結(jié)果，分析基線的設(shè)置原則以擴(kuò)增曲線熒光值的5%為準(zhǔn)，這恰好是PCR擴(kuò)增儀容易產(chǎn)生噪音的位置，因此軟件具有依據(jù)整體擴(kuò)增趨勢(shì)進(jìn)行優(yōu)化的功能顯得尤為重要，從而使獲得的熒光曲線趨于光滑，而得出重復(fù)性較好的結(jié)果。對(duì)擴(kuò)增效率較差的PCR試劑盒，如果在沒有曲線優(yōu)化功能的PCR儀上擴(kuò)增，將獲得顏值極差的擴(kuò)增曲線，甚至無法判斷結(jié)果，針對(duì)這一情況，有些試劑廠家針對(duì)不同的PCR儀器制作相應(yīng)的試劑盒。
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