DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚,是一種能夠透過完整的細(xì)胞膜與DNA強(qiáng)力結(jié)合的熒光染料, DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè),染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè);另外DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色。
在熒光顯微鏡觀察下,DAPI染劑是利用紫外波長的光線激發(fā)。當(dāng)DAPI與雙股DNA結(jié)合時(shí),最大吸收波長為358nm,最大發(fā)射波長為461nm,其發(fā)散光的波長范圍含蓋了藍(lán)色至青綠色。DAPI的發(fā)散光為藍(lán)色,且DAPI和綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)或Texas Red染劑(紅色熒光染劑)的發(fā)散波長,僅有少部分重疊,研究員可以善用這項(xiàng)特性在單一的樣品上進(jìn)行多重?zé)晒馊旧?/p>
使用說明:
該染色液從-20℃取出后解凍即可直接使用,無需做其他處理。
1)對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片,可加入少量DAPI染色液。對(duì)于懸浮細(xì)胞,需至少加入待染色樣品體積3倍的染色液,混勻,室溫放置3-5分鐘。但是對(duì)于需要進(jìn)行免疫熒光染色的樣品則先進(jìn)行免疫熒光染色,然后再按上述說明進(jìn)行DAPI染色。
2)在加入DAPI染色劑3~5min后,吸干染色液,用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次,使觀察背景干凈清晰。
3)直接在熒光顯微鏡下觀察。
注意事項(xiàng):
1)DAPI染色液的濃度適用于各種常規(guī)染色的需要。
2)熒光染料都存在淬滅的問題,建議染色后盡快檢測(cè)。
3)為減緩熒光淬滅,可以使用抗熒光淬滅封片液。
4)避免反復(fù)凍融,否則容易失效。
5)DAPI對(duì)人體有一定刺激性,請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。
保存條件:-20℃避光保存。
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