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熒光定量PCR是指在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，通過對擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)檢測,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。具有靈敏度高，特異性強(qiáng)，能實(shí)現(xiàn)多重反應(yīng)，據(jù)實(shí)時(shí)性和準(zhǔn)確性等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)研究和醫(yī)學(xué)研究等領(lǐng)域。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)原理介紹：
將標(biāo)記有熒光素的探針與模板DNA混合后，完成高溫變性、低溫復(fù)性、適溫延伸的熱循環(huán)，并遵守聚合酶鏈反應(yīng)規(guī)律，與模板DNA互補(bǔ)配對的探針被切斷，熒光素游離于反應(yīng)體系中，在特定光激發(fā)下發(fā)出熒光；隨著循環(huán)次數(shù)的增加，被擴(kuò)增的目的基因片段呈指數(shù)規(guī)律增長，通過實(shí)時(shí)檢測與之對應(yīng)的隨擴(kuò)增而變化熒光信號(hào)強(qiáng)度，求得Ct值，同時(shí)利用數(shù)個(gè)已知模板濃度的標(biāo)準(zhǔn)品作對照，即可得出待測標(biāo)本目的基因的拷貝數(shù)。
熒光定量PCR使用環(huán)境的要求：
儀器應(yīng)安放在灰塵較少并遠(yuǎn)離水源和熱源的地方，無腐蝕性氣體或強(qiáng)磁場干擾。
同一環(huán)境內(nèi)放置多臺(tái)儀器時(shí)，儀器之間應(yīng)保持50cm 以上距離，降低儀器之間的影響。
為保護(hù)儀器電路和保證試驗(yàn)結(jié)果，儀器建議通過穩(wěn)壓器和UPS（不間斷電源）后連接電源。
請勿和其它大功率器件如離心機(jī)、空調(diào)等共用同一個(gè)電源插座以免電源電壓波動(dòng)影響系統(tǒng)運(yùn)行。
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