獸藥抗生素可以通過藥物生產(chǎn)排放、污水處理排放、處理未使用的或過期的藥物、坡面徑流、施用投喂過抗生素的牲畜的糞便作為肥料等多個方式進入環(huán)境，其中，最主要途徑為施用投喂過抗生素的牲畜糞便于農(nóng)田(圖1)

研究發(fā)現(xiàn)，進入人類和動物體內的抗生素不會被全部吸收，約有30%−90%會隨著尿液或糞便排出。因未被利用和處理，每年約3800噸抗生素被排放到環(huán)境中，其中約46%的抗生素排至水體中，剩余部分則通過農(nóng)業(yè)施肥和污泥回用擴散到土壤環(huán)境中。對大多數(shù)畜禽來說，在施藥兩天后能在其排泄物會回收到72%活性成分。四環(huán)素，土霉素，磺胺二甲嘧啶，恩諾沙星，泰樂菌素等獸藥抗生素在豬糞，牛糞，雞糞中普遍地被檢測到，其中四環(huán)素類的排泄率為69%-86%，磺胺類的排泄率為80%-90%，喹諾酮類的排泄率為30%-83.7%，大環(huán)內酯類的排泄率為50%-100%。

除了過量使用抗生素所造成的的不良反應外，環(huán)境抗生素污染的真正危害在于加劇細菌耐藥性，會帶來生態(tài)圈和人體不可逆轉的損害。因為當使用某種抗生素時，總有一些細菌，對這種抗生素是耐藥的，使用過抗生素以后，對抗菌藥敏感的菌被殺死，但耐藥菌卻“安然無恙”，同時，因為失去了競爭對手，耐藥細菌會愉快地生長，直至接近或超過之前的水平，繼續(xù)在細菌、動物和人類之間傳播。而此時再使用之前的抗生素，對這些耐藥菌已經(jīng)沒有作用了。由此可見，本來要殺敵的抗生素卻使敵人變得更加強大，“超級細菌”由此而生。耐抗生素病原菌的出現(xiàn)，已經(jīng)成為公共衛(wèi)生危機之一。因此研究這類抗生素的污染處理技術顯得尤為重要，本文以四環(huán)素為例，針對多種樣品中抗生素殘留的前處理提供一站式服務，旨在為實驗室人員提供更加智能高效的前處理方案。

01  提取

動物源性食品

準確稱量1.00 g于MHS-60多樣品均質系統(tǒng)均質后的樣品于50 mL塑料離心管中，向其中EDTA緩沖液8 mL，用MultiVortex多樣品渦旋混合器渦旋1 min，超聲20 min，-2℃1000 rpm離心5 min，收集上清液。殘渣中加入磷酸鹽緩沖液8 mL，重復提取1次，合并兩次提取液，混勻備用。

植物源性食品

稱取10.0 g于MultiGrinder高通量智能動植物研磨均質儀切成碎末的新鮮蔬菜樣品于具塞三角瓶中，加入20 mL 0.02 mol/L氯化鎂-檸檬酸混合溶液于45℃下振蕩提取45 min，過濾，殘渣再用20 mL甲醇重復提取1次，FlexiVap全自動智能平行濃縮儀揮發(fā)除去甲醇，用5 mL 0.02 mol/L氯化鎂-檸檬酸混合溶液復溶，與氯化鎂-檸檬酸提取液混合后待過柱凈化富集。

飼料樣品

準確稱取3.0 g樣品（準確至0.01 g），置于50 mL具塞錐形瓶中，加入甲醇10 mL，MultiVortex多樣品渦旋混合器旋渦混勻1 min，加入鹽酸溶液30 mL，MultiVortex多樣品渦旋混合器旋渦混勻1 min，超聲20 min，移至50 mL離心管中，5 000 rpm離心10 min，取上清液，待凈化。

土壤樣品

風干后的土壤樣品，粉碎機粉碎后，過60目篩網(wǎng)，準確稱取15 g過篩網(wǎng)后的樣品，置于iQSE-06智能快速溶劑萃取儀的萃取池中，加20 g硅藻土，以V(甲醇):V(乙腈)=2:1溶劑進行提?。惶崛⊥戤吅?，將提取液置FlexiVap全自動智能平行濃縮儀中氮吹至近干(控制溫度45℃)，加1.0 mL甲醇溶解殘渣，MultiVortex多樣品渦旋混合器渦旋1 min后，用0.22 μm濾膜過濾即得，快速溶萃取條件見下表。

表1 快速溶劑萃取條件

化妝品樣品（一般無需凈化）

準確稱取1 g均勻試樣(精確至0.01 g)，置入50 mL塑料離心管中,加入約20 mL甲醇-草酸溶液(v1：1)，MultiVortex多樣品渦旋混合器渦旋混勻后，用甲酸或氨水調節(jié)pH至7.0，超聲提取20 min，以4 000 rpm離心3 min。上清液轉移至25 mL容量瓶，用甲醇定容。過0.22 μm濾膜，供高效液相色譜儀測定。

02  凈化

各類樣品的凈化均可以用iSPE-864全自動智能固相萃取儀來完成，具體方法如下表所示

方法參考

動物源性食品：GB 31658.17-2021 食品安全國家標準 動物性食品中四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類藥物殘留量的測定 液相色譜－串聯(lián)質譜法

植物源性食品：賀德春, 吳根義, 許振成,等. 小白菜和白蘿卜對四環(huán)素類抗生素的吸收累積特征[J]. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學學報, 2014, 33(6):5.

飼料：DB13/T 1384.2-2011 飼料中土霉素、四環(huán)素、金霉素的測定

土壤提取：毛娜, 孫志洪, 張麗. HPLC-MS/MS法測定養(yǎng)殖場土壤中6種常見抗生素微量殘留[J]. 化學試劑, 2021, 43(7):6.

土壤凈化：NY/T 3787-2020 土壤中四環(huán)素類、氟喹諾酮類、磺胺類、大環(huán)內酯類和氯霉素類抗生素含量同步檢測方法 高效液相色譜法

化妝品：SN/T 3897-2014 化妝品中四環(huán)素類抗生素的測定

上述處理方案中使用到的儀器

MultiVortex多樣品渦旋混合器優(yōu)勢

• 高通量 配置多種規(guī)格樣品管

• 高轉速應對各種難溶樣品

• 可預存12種渦旋程序

MHS-60 多樣品均質系統(tǒng)優(yōu)勢

• 可同時均質6個樣品

• 刀頭自動嚙合，噪音小，占地面積小

• 可預存12種均質程序

MultiGrider高通量智能動植物研磨均質儀優(yōu)勢

• 三維立體振蕩技術，進行高動能撞擊或摩擦

• 智能安全防護，運行開始后自動鎖緊防護罩

• 可儲存32種以上研磨均質方法和程序提取曲線

iSPE-864全自動智能固相萃取儀優(yōu)勢

• 八通道，可批量處理64個樣品

• 自動完成活化、上樣、淋洗、氮吹、洗脫等全流程

FlexiVap-12/24 全自動智能平行濃縮儀優(yōu)勢

• 氮吹角度自動調節(jié)（0-90°），先斜吹后直吹

• 同時濃縮12/24個大體積樣品，替代傳統(tǒng)旋蒸 氮吹模式

• 各通道獨立控制，均配備紅外液位傳感器實現(xiàn)精確定容

FV32Plus全自動高通量智能平行濃縮儀優(yōu)勢

• 高通量，最多可以同時處理32個樣品

• 集合針追隨和針渦旋雙模式

• 各通道獨立控制，均配備紅外液位傳感器實現(xiàn)精確定容