色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要,稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中,需要注意下列問題,以維護(hù)色譜柱。
如果你遇到基線漂移,知道是什么問題嗎?漂移問題主要包括基線漂移和保留時間漂移。
1基線漂移
一般說來,機(jī)器剛起動時,基線容易漂移,大概要半個小時的平衡時間,如果,你用了緩沖溶液或緩沖鹽,還有就是在低波長下(220nm)平衡時間相對會比較長,但是,如果你在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)基線漂移,則你要考慮下面的原因:
?、僮贤鉄裟芰坎蛔?。
解決方法:
更換新的紫外燈;
?、谥鶞夭▌印?/div>
解決方法:
控制好柱子和流動相的溫度,檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱。
?、哿魍ǔ乇晃廴净蛴袣怏w。
解決方法:
用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池(最好斷開柱子)。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。
?、芰鲃酉辔廴?、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。
解決方法:
檢查流動相的組成,使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑。
?、輼悠分杏袕?qiáng)保留的物質(zhì)(高K'值)以饅頭峰樣被洗脫出,從而,表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。
解決方法:
使用保護(hù)柱,如有必要,在進(jìn)樣之間。在分析過程中,定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。
⑥檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處。
解決方法:
將波長調(diào)整至最大吸收波長處;
?、吡鲃酉嗟膒H值沒有調(diào)節(jié)好。
解決方法:
加適量的酸或堿調(diào)至最佳pH值;
2保留時間漂移
保留時間重現(xiàn)是液相性能好壞的一個重要標(biāo)志,同一種東西,兩次的保留時間相差不要超過15s,超過了半分鐘可看做保留時間漂移,就無法進(jìn)行定性,你要考慮以下原因:
?、贉乜夭划?dāng)。
解決方法:
調(diào)好柱溫,檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱。
②流動相比例變化。
解決方法:
檢查四元泵的比例閥是否有故障。
?、凵V柱沒有平衡。
解決方法:
在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時間平衡色譜柱。
?、芰魉僮兓?。
解決方法:
重新設(shè)定流速。
?、荼弥杏袣馀荨?/div>
解決方法:
從泵中除去氣泡。
3峰型異常問題
峰型問題是液相的主要問題,在做液相過程中,我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰型,對于各種各樣的異常峰,要區(qū)別對待,從主要問題出發(fā),一個一個加以解決。
?、偎蟹寰鶠閷挿?。
解決方法:
系統(tǒng)未達(dá)到平衡;
溶解樣品的溶劑極性比流動相差很多;
色譜柱尺寸及類型選擇不正確;
色譜柱或保護(hù)柱被污染或柱效降低;
溫度變化造成的影響。
?、谒龇灞阮A(yù)想的小。
解決方法:
樣品黏度過大;進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差;檢測器設(shè)置不正確,定量環(huán)體積不正確;檢測池污染;檢測器燈出現(xiàn)問題。
?、凵V圖中未出峰。
解決方法:
系統(tǒng)未進(jìn)樣或樣品分解;
泵未輸液或流動相使用不正確;
檢測器設(shè)置不正確;
針對以上情況成因作相應(yīng)調(diào)整即可。
?、芤粋€峰或幾個峰是負(fù)峰。
解決方法:
流動相吸收本底高;進(jìn)樣過程中進(jìn)入空氣;樣品組分的吸收低于流動相。
⑤所有峰均為負(fù)峰。
解決方法:
信號電纜接反或檢測器輸出極性設(shè)置顛倒;
光學(xué)裝置尚未達(dá)到平衡。
⑥出現(xiàn)雙峰或肩峰。
解決方法:
進(jìn)樣量過大;樣品濃度過高;
保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞;
保護(hù)拄或色譜柱污染或失效;
柱塌陷或形成短通道。
⑦前伸峰。
解決方法:
進(jìn)樣量或樣品濃度高;
溶解樣品的溶劑較流動。
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