進(jìn)入展臺(tái) 在線留言

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您？在線咨詢

放射自顯影術(shù)實(shí)驗(yàn)

來源：深圳市安培生物科技有限公司 2022年12月06日 15:28

簡(jiǎn)介

培養(yǎng)細(xì)胞的放射自顯影術(shù)射性既可以研究細(xì)胞本身的物質(zhì)代謝之外，還可用來分析細(xì)胞的動(dòng)態(tài)活動(dòng)、細(xì)胞周期等。

原理

培養(yǎng)細(xì)胞放射自顯影術(shù)原理是將培養(yǎng)細(xì)胞的放射性同位素釋放射線，作用于感光乳膠，使感光乳膠中的鹵化銀感光形成潛影，再經(jīng)顯影劑作用，感光的鹵化銀還原成黑色的銀顆粒，未感光的銀鹽則經(jīng)定影去除，在乳膠中留下清楚明確的圖像。

材料與儀器

器材：

① 培養(yǎng)的細(xì)胞

② 細(xì)胞傳代培養(yǎng)的設(shè)備

③ 直徑 3.5 cm 塑料培養(yǎng)皿（或 50 ml 培養(yǎng)瓶）

④ 2.2 cm x 2.2 cm 蓋片（或自裁成 6 mm x 40 mm，放入培養(yǎng)瓶）

⑤ 曝光鉛盒或黑色塑料盒

⑥ 電磁攪拌器

⑦ 恒溫臺(tái)（可調(diào)節(jié)溫度以烘干乳膠）

⑧ 載片

⑨ 中性樹膠

⑩ 暗室及相應(yīng)設(shè)備

試劑：

① 同位素標(biāo)記物（如 3 H-TdR、3 H-UdR 等）

② 液體乳膠（常用核 IN 號(hào)）

③ 顯影液

④ 定影液

⑤ 甲醇

⑥ 吉姆薩染液

步驟

培養(yǎng)細(xì)胞放射自顯影術(shù)的基本過程可分為以下幾步:

（1）同位素標(biāo)記物與細(xì)胞的結(jié)合

A. 用培養(yǎng)基稀釋同位素標(biāo)記物，培養(yǎng)細(xì)胞放射自顯術(shù)常用濃度為 0.1～2 μ Ci/ml。如采用 3 H-TdR，建議濃度為 0.5～1 μ Ci/ml。

B. 棄去培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基，用 Hanks 緩沖液洗涮 1 次，加入上述含有同位素的培養(yǎng)基。一般 50 ml 培養(yǎng)瓶加 3 ml 培養(yǎng)液。

C. 將上述細(xì)胞置 37 ℃ 恒溫箱溫育一定時(shí)期（溫育時(shí)間按實(shí)驗(yàn)要求和同位素種類及濃度等因素而定，一般如 3 H-TdR 在 1 μ Ci/ml 濃度下，溫育 1～4 h 即可），然后棄去培養(yǎng)液，用 Hanks 液涮洗 3 次，以去除未摻入細(xì)胞內(nèi)的放射性物質(zhì)。

（2）固定

按常規(guī)細(xì)胞學(xué)方法進(jìn)行，但應(yīng)避免使用含有重金屬離子的固定液，以免增加本底顆粒數(shù)目。建議用純甲醇固定，時(shí)間 30 min 以上。

（3）涂布乳膠

A. 乳膠的準(zhǔn)備于暗室中紅光下，將核 IN 乳膠從不透光的容器中取出，置于 10 ml 小燒杯中，將小燒杯置于電磁攪拌器上，放入潔凈鐵芯小玻棒 1 枚，開啟電磁攪拌器，使乳膠化，為稀釋起見，可加入適量附加液或三蒸水，攪拌數(shù)分鐘使乳膠與附加液充分混合均勻。如無電磁攪拌器，可將三蒸水 40 ℃ 預(yù)熱，然后加入等量或 2/3 量的核 IN 乳膠，用干凈玻棒攪拌均勻，應(yīng)避免出氣泡。

B. 將生長(zhǎng)有培養(yǎng)細(xì)胞的小蓋片條（或培養(yǎng)皿中的方蓋片）取出，將其一端用膠布粘于載片上（注意：使有細(xì)胞的一面朝上，此面外觀較粗糙），然后在有細(xì)胞的蓋片上滴 1 滴乳膠，用吸管將乳膠輕輕涂開。

C. 將上述涂有乳膠的玻片直立于切片架上，使乳膠盡量成為薄層，再以低速小風(fēng)扇吹干。

D. 待乳膠干硬后（10～20 min），將片子置于預(yù)先置有干燥劑（常用硅膠或氯化鈣）的曝光盒內(nèi)，用黑紙將曝光盒包嚴(yán)，注明同位素標(biāo)本記號(hào)，置 4 ℃ 冰箱內(nèi)，或室溫下曝光。

（4）曝光

曝光時(shí)間隨標(biāo)本的放射性強(qiáng)度、同位素劑量和實(shí)驗(yàn)要求而定。為闡明同位素在細(xì)胞和組織內(nèi)的精確定位，曝光時(shí)間要短；為了顯示小量放射性同位素的定位，曝光時(shí)間宜長(zhǎng)。對(duì)半衰期長(zhǎng)的同位素，活性小的標(biāo)本應(yīng)相應(yīng)地增加曝光時(shí)間。為選擇最佳曝光時(shí)間，可參考同類的工作，一般應(yīng)進(jìn)行試驗(yàn)性曝光，以決定最佳曝光時(shí)間。3 H、C、35 S 標(biāo)記物通常曝光 3～7 d 即可。

（5）顯影與定影

顯影與定影時(shí)間隨曝光時(shí)間和同位素劑量而不同，在一般照相的顯影液中，于 18～20 ℃ 時(shí)，顯影 3～5 min，然后在 1% 乙酸溶液中置 1～3 min，再轉(zhuǎn)入定影液內(nèi) 30 min 左右。

（6）染色

將標(biāo)本用自來水連續(xù)沖洗數(shù)分鐘（切忌水流過急、過大），再以三蒸水洗涮 1 次，晾干后用吉姆薩染色（也可用 HE 染色）。

（7）封片

染色后晾干，用中性樹膠封片，在油鏡下觀察、攝影。

注意事項(xiàng)

1. 涂布乳膠有各種方法，其原則是涂布要均勻一致，此外盡可能地要稀薄。

2. 從涂布乳膠開始須在暗室內(nèi)進(jìn)行，直至定影完畢方可見光。

3. 同位素廢棄物處理須嚴(yán)格按要求執(zhí)行，不可污染環(huán)境。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對(duì)細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)

相關(guān)產(chǎn)品

免責(zé)聲明

凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。

国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

放射自顯影術(shù)實(shí)驗(yàn)

簡(jiǎn)介

原理

材料與儀器

步驟

注意事項(xiàng)

免責(zé)聲明

聯(lián)系我們

關(guān)注我們