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PCR儀已經(jīng)成為分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、食品工業(yè)、司法科學(xué)、生物技術(shù)、環(huán)境科學(xué)、微生物學(xué)、臨床診斷、流行病學(xué)、遺傳學(xué)、基因芯片、基因檢測(cè)、基因克隆、基因表達(dá)等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的一種實(shí)驗(yàn)室儀器。
PCR擴(kuò)增儀直接影響臨床檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、甚至工作效率。PCR儀器品牌的選擇,是首先關(guān)系到實(shí)驗(yàn)進(jìn)行是否出現(xiàn)故障的重要因素，你知道選購(gòu)PCR儀要進(jìn)行哪些篩選嗎？
一、溫度控制
對(duì)普通PCR儀來(lái)說(shuō)，溫度控制主要是指溫度的準(zhǔn)確性、均勻性、以及升降溫速度，對(duì)梯度PCR儀來(lái)說(shuō)，除了溫度的準(zhǔn)確性和均勻性、升降溫速度以外，還必須考慮儀器在梯度模式和標(biāo)準(zhǔn)模式下是否具有同樣的溫度特性。
溫度的準(zhǔn)確性是指樣品孔溫度與設(shè)定溫度的一致性，它直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗。如果排除樣品加入過(guò)程中的問(wèn)題，對(duì)于PCR反應(yīng)而言最重要的莫過(guò)于溫度控制的準(zhǔn)確性，由于PCR是一個(gè)幾何級(jí)數(shù)擴(kuò)增的過(guò)程，擴(kuò)增過(guò)程中退火溫度的細(xì)微變化會(huì)被放大而直接影響結(jié)果，不論是變性、退火還是延伸都需要準(zhǔn)確控制溫度，對(duì)退火溫度而言溫控顯的尤為重要，有時(shí)1度甚至0.5度的差異也能決定實(shí)驗(yàn)的成功與失敗，所謂差之毫厘，謬之千里。因而對(duì)PCR擴(kuò)增儀而言溫度控制就意味著質(zhì)量。
溫度的均勻性是指樣品孔間的溫度差異，它關(guān)系到在不同樣品孔進(jìn)行反應(yīng)結(jié)果的一致性。我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)有時(shí)用同樣的樣品，同樣的PCR反應(yīng)程序，最后的結(jié)果竟然差異非常明顯，或許就是因?yàn)椴煌恢玫臏囟炔痪恍运?。一些使用過(guò)早期PCR儀的腦子格外靈光的研究人員偏愛(ài)使用PCR儀中間某幾個(gè)固定的孔，就是因?yàn)檫^(guò)往反復(fù)的教訓(xùn)和認(rèn)真的思索得出了這樣的結(jié)論，PCR儀的溫度均勻性不好，特別是最外周的樣品孔情況更差，很有可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果-即“位置的邊緣效應(yīng)”會(huì)影響結(jié)果的可重復(fù)性。正是這種位置效應(yīng)對(duì)定量PCR的結(jié)果的影響更為明顯。
溫度控制除了精確度，還有一個(gè)廠家喜歡大力宣傳的指針-升降溫的速度。更快的升降溫速度，可以縮短反應(yīng)進(jìn)行的時(shí)間，而且縮短了可能的非特異性結(jié)合、反應(yīng)的時(shí)間，能提高PCR反應(yīng)特異性。因此從本質(zhì)而言溫控方式就從以前相對(duì)穩(wěn)定耐用的機(jī)械式轉(zhuǎn)向了升降溫更快速的半導(dǎo)體。除了機(jī)械本身的原因，影響升降溫速度的還有制作承托樣品管的基座模塊的材料的導(dǎo)熱性。
二、儀器的功能性和人性化設(shè)計(jì)
熱蓋：現(xiàn)在的PCR儀一般均配備熱蓋，熱蓋溫度設(shè)為105℃，使樣品管頂部的溫度達(dá)到105℃左右，蒸發(fā)的反應(yīng)液就不會(huì)產(chǎn)生凝集在管蓋上而改變反應(yīng)體積，這樣用戶就無(wú)需再向反應(yīng)管內(nèi)加石蠟油，直接減少后繼操作的麻煩。如果是旋轉(zhuǎn)加壓的熱蓋就要特別小心，因?yàn)閴毫Φ竭_(dá)時(shí)沒(méi)有明顯的提示，用戶需要根據(jù)經(jīng)驗(yàn)將熱蓋旋到合適位置，不太容易掌握。如果過(guò)松，熱蓋沒(méi)有充分接觸反應(yīng)管而影響結(jié)果；如果過(guò)緊，則會(huì)導(dǎo)致反應(yīng)管變形，甚至可能造成熱蓋的機(jī)械故障。
樣品基座：PCR反應(yīng)多在0.2或者0.5的管子中進(jìn)行，多數(shù)PCR儀也配備了不同的可更換樣品槽適配不同的樣品管。
軟件：新的PCR儀都比較注重程序編寫(xiě)的簡(jiǎn)易性。大屏幕，顯示實(shí)時(shí)信息，倒計(jì)時(shí)，記憶存儲(chǔ)多個(gè)程序、自動(dòng)斷電保護(hù)等都有助于實(shí)驗(yàn)室中的復(fù)雜環(huán)境使用。
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