原理
細胞懸液用碘化丙啶和二乙酰熒光素的混合液染色,用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測。
材料與儀器
步驟
材料
無菌
單細胞懸液
雙醋酸熒光素,10ug/ml,溶于 HBSS
碘化丙啶,500ug/ml
非滅菌
熒光顯微鏡
濾光片
熒光素:激發(fā) 450/590 nm ,發(fā)射 LP 515 nm
碘化丙啶:激發(fā) 488nm ,發(fā)射 615 nm
操作步驟
1. 細胞懸液的制備與染料排斥法相同(見方案 22.1),但是生長液中不含酚紅。
2. 以 1 : 10 的比例加入熒光素染料混合液,二乙酰熒光素的終濃度為 l ug/ml,碘化丙啶的終濃度為 50ug/ml。 :
3. 將細胞置于 37°C , 溫育 10 min。
4. 將一滴細胞滴在載玻片上,蓋上蓋玻片,用熒光顯微鏡觀察。
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