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小鼠單核巨噬細胞白血病細RAW264.一般為圓形或橢圓形，小而透亮。因為其具有較強的吞噬能力，并在吞噬抗原后釋放趨化因子，促使細胞分化出偽足，粘附攀爬能力也因此增強。若細胞吞噬抗原過多、培養(yǎng)環(huán)境惡劣就會促使細胞呈現(xiàn)出梭形、長梭形，鏡下觀察就會發(fā)現(xiàn)細胞形態(tài)變?yōu)樗笮吻颐娣e變大，不再是具有細長偽足的類圓形小細胞。這也是出現(xiàn)消化困難的一個主要原因。
小鼠單核巨噬細胞白血病細RAW264.7的培養(yǎng)注意事項和要點：
1.由于RAW264.7細胞易有不同形態(tài)，傳代時就會發(fā)現(xiàn)形態(tài)變?yōu)樗笮蔚募毎茈y消化下來，輕敲培養(yǎng)皿細胞不會脫落，用力吹打又容易對細胞產生較大損傷，因此要盡量避免細胞發(fā)生形態(tài)改變。即在接種細胞時保持一個適中的傳代密度，避免其向終末細胞分化，因為一旦細胞發(fā)生分化變?yōu)殚L形是無法恢復的，這是培養(yǎng)RAW264.7細胞時最需要注意的問題。
2.RAW264.7細胞喜歡連片生長，正常狀態(tài)下應該是一小片一小片的分布在培養(yǎng)皿中，片片之間不相連接，等到長到更多更密的時才會連成大片，但同時也會疊加成層，容易出現(xiàn)部分細胞飄起無法貼壁的問題。所以，要關注好細胞的匯合程度，控制好細胞的生長速度，不能等到疊加成層時才去傳代。
3.RAW264.7細胞傳代后貼壁時間較短，半小時左右絕大部分細胞就能夠貼下去，剛貼壁時細胞呈圓形，折光度很好，鏡下觀察如小珍珠狀一個個地散落于培養(yǎng)皿中。生長一段時間后，部分細胞會變成類似四角形，伸出偽足之類的。這個時候就是在提醒你注意傳代了，此時無論匯合度如何都需要進行傳代了，因為形態(tài)發(fā)生改變的細胞對實驗結果會產生較大影響，最終造成實驗數(shù)據不理想。
4.在細胞生長的初始階段，細胞以貼壁的形式生長并呈現(xiàn)出長方體的形態(tài)和有“偽足”延伸。隨著培養(yǎng)時間的增加，細胞呈現(xiàn)圓形并以疊加的形式生長。細胞密度達到一定的程度，會有細胞以懸浮的方式散落到到培養(yǎng)基中，鏡下觀察會同時出現(xiàn)懸浮和貼壁兩種形態(tài)。
5.該細胞傳代時不需要用胰酶消化。傳代時，吸走部分培養(yǎng)液，留下少許培養(yǎng)液（例如使用T25培養(yǎng)瓶留下2 ml），用無菌細胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細胞刮落，充分吹打后接種到新的裝有新鮮培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶內，混勻后進行培養(yǎng)。
6.該細胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當細胞密度較大時，細胞會輕微脫落變圓或者許多細胞堆積在一起，有些細胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細胞是存活的，在傳代時應收集起來，離心后細胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。
7.血清質量差異可能引起細胞貼壁能力變化，建議選用高質量的胎牛血清。
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