微生物在自然界中呈混雜狀態(tài)存在，要獲得所需菌種，必需從中把它們分離出來。在保存菌種時(shí)不慎受到到污染也需予以分純。微生物分離和純化的方法很多，但基本原理卻是相似的，即將待分離的樣品進(jìn)行一定的稀釋，并使微生物的細(xì)胞（或孢子）盡量以分散狀態(tài)存在，然后使其長成一個(gè)個(gè)純種單菌落。然而上述工作又離不開接種，即將一種微生物移到另一滅過菌的培養(yǎng)基上的過程。

在接種的過程中需要注意哪些問題呢？

（1）接種室應(yīng)保持清潔，用煤粉酚皂液擦洗臺面及墻壁，定期用乳酸或甲醛熏蒸。每次使用前，均應(yīng)用紫外燈滅菌。定期對接種室作無菌程度的檢查。

（2）進(jìn)入接種室前，應(yīng)先做好個(gè)人衛(wèi)生工作，在緩沖間內(nèi)要更換工作鞋帽、工作衣、戴口罩。工作衣、工作鞋、口罩只準(zhǔn)在接種室內(nèi)使用。不準(zhǔn)穿到其它地方去，并要定期更換、消毒。

（3）接種的試管、三角并瓶等應(yīng)做好標(biāo)記，注明培養(yǎng)基、菌種的名稱、日期。移入接種室內(nèi)的所有物品，均須在緩沖室用70%酒精擦試干凈。

（4）接種前，雙手用70%酒精或新潔爾消毒，操作過程不離開酒精燈火焰；棉塞不亂放；接種工具使用前后均需火焰滅菌。

（5）恒溫培養(yǎng)箱應(yīng)經(jīng)常清潔消毒。

微生物實(shí)驗(yàn)操作中注意事項(xiàng)

1．由被檢驗(yàn)標(biāo)本或培養(yǎng)物中取材觀察細(xì)菌形態(tài)時(shí)，必須使用接種環(huán)。接種環(huán)系采用一段長約5 ～8cm 硬度適中的鎳質(zhì)電阻絲或特制鉑絲，安置在一金屬或玻璃棒上制成。無環(huán)者則稱接種針。

2．接種環(huán)或接種針每次使用前后，均須火焰滅菌。即在乙醇燈火焰上徹di燒灼1 次，金屬棒或玻璃棒部分亦須轉(zhuǎn)動(dòng)著通過火焰3 次，用后燒灼時(shí)，先將近環(huán)處鎳絲置于火焰中，使熱導(dǎo)向接種環(huán)，如直接將環(huán)燒灼，則環(huán)上殘余菌液可因突然受高熱而爆烈四濺，有傳染危險(xiǎn)。待環(huán)上菌液蒸發(fā)干涸后，再將接種環(huán)以垂直方向于火焰中燒灼滅菌，zui后再將金屬棒或玻璃棒部分往復(fù)通過火焰。接種針用后滅菌時(shí)與接種環(huán)同。

3．接種環(huán)（針）經(jīng)火焰后，需待冷卻后再沾取標(biāo)本或放置于工作臺上，以防燙死微生物和燒損桌面。

4．由培養(yǎng)基或試管培養(yǎng)物中沾取標(biāo)本時(shí)，培養(yǎng)瓶口、試管口在打開后及關(guān)閉前，應(yīng)于火焰上通過1 ～2 次，以殺死可能從空氣中落入的雜菌和由培養(yǎng)物而來的致病菌。打開瓶塞或試管塞時(shí)，應(yīng)將棉塞上端夾于手指間適當(dāng)?shù)奈恢茫坏脤⒚奕我夥胖脛e處。

5．不染色標(biāo)本和染色標(biāo)本觀察后，應(yīng)立即投入消毒液內(nèi)滅菌。

6．使用過玻片，務(wù)須徹di消除玻片上的染色細(xì)菌后再用，否則再次使用時(shí)可能做出錯(cuò)誤診斷。