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植物油中黃曲霉毒素B1含量的免疫親和柱法

來源：無錫冠一生物科技有限公司 2023年01月04日 16:40

植物油中黃曲霉毒素B1含量的免疫親和柱法

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黃曲霉毒素B1的介紹

黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1簡寫為AFB1)是二氫呋喃氧雜萘鄰

的衍生物，含有一個雙呋喃環(huán)和一個氧雜萘鄰tong(香dou素)，其污染的食物主要是花生、玉米、稻谷、小麥、花生油等糧油食品。黃曲霉毒素B1是目前已知的化學物質(zhì)中致癌性強的一種，對肝臟的損害極其嚴重。

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黃曲霉毒素B1的安全量

國家食品安全標準《GB 2761-2017》規(guī)定植物油脂（花生油、玉米油除外）中黃曲霉毒素B1的允許量不得超過10 ug/kg?；ㄉ?、玉米油中黃曲霉毒素B1的允許量不得超過20 ug/kg。

冠一生物開發(fā)使用免疫親和柱法檢測植物油中黃曲霉毒素B1的含量，平均回收率為92.9%，RSD 4.1%,為客戶提供關(guān)于植物油中黃曲霉毒素B1檢測有效的解決方案。

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實驗?zāi)康?/span>

本研究利用免疫親和柱法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為分析方法，檢測植物油中黃曲霉毒素B1的含量。該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機溶劑的使用，操作簡便。

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實驗?zāi)繕宋?/span>

黃曲霉毒素B1（CAS:1162-65-8）。

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應(yīng)用范圍

本方法適用于植物油中黃曲霉毒素B1檢測的HPLC檢測及確證。

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參考標準

《GB 5009.22-2016食品安全國家標準食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》。

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實驗材料

黃曲霉毒素B1免疫親和柱

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實驗方法

1.樣品提取

準確稱取植物油試樣5.0 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL離心管中，加入20 mL乙腈-水（84+16）溶液，渦旋混合1 min，超聲提取20 min，在5000 r/min離心10 min，提取上清液4 mL于另一個離心管中，加入21 mL水，混勻待凈化。

2.免疫親和柱凈化

(1)上樣：將12 mL注射器連接于免疫親和柱上端，取待凈化液樣品液以1-2滴/秒的速度通過免疫親和柱，棄掉流出的液體。

(2)淋洗和洗脫：用20 mL水淋洗柱子，分兩次淋洗，棄掉流出的液體；抽干小柱；加入2×1 mL甲醇緩慢洗脫親和柱，流速約為2-3滴/秒；50 ℃下氮吹至近干，待衍生。

3.衍生化反應(yīng)

(1)加入100 uL三氟yi酸，200 uL正己烷于待衍生樣品中，于40 ℃水浴避光衍生15 min。

(2)重新溶解：50 ℃下氮吹至近干，加入1mL乙腈-水（15+85）溶液溶解，0.22 um濾膜過濾，供HPLC分析。

4.HPLC條件

設(shè)備：Waters Alliance 2695

色譜柱：InerSustain^®-C18 (4.6 mmX250 mm, 5 μm)

檢測器：Waters 2475熒光檢測器

檢測波長：激發(fā)波長：365 nm 發(fā)射波長：435 nm

流動相：A：乙腈 B：水

洗脫方式：梯度洗脫

表1 流動相梯度洗脫程序

流速：1 mL/min

進樣體積：10 uL

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實驗結(jié)果

1、1.0 ug/kg 豬肉基質(zhì)中黃曲霉毒素B1的添加回收結(jié)果

表1 1.0 ug/kg豬肉基質(zhì)中黃曲霉毒素B1的添加回收結(jié)果

2、添加水平為1.0 ug/kg豬肉基質(zhì)中黃曲霉毒素B1檢測的液相色譜圖

圖1 添加水平為1.0 ug/kg豬肉基質(zhì)中黃曲霉毒素B1檢測色譜圖

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