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小鼠肝細胞培養(yǎng)實驗

來源:深圳市安培生物科技有限公司   2023年01月05日 11:07  

原理

直接從生物體內獲取組織細胞進行的首-次培養(yǎng)稱為原代細胞培養(yǎng)。原代培養(yǎng)是建立各種細胞系的第一步,是從事培養(yǎng)工作的人員應熟悉和掌握的最基本的技術。根據培養(yǎng)方法不同分為組織塊培養(yǎng)法和單層細胞培養(yǎng)法。

材料與儀器

小鼠
DMEM DMEM 胰酶 PBS
飯盒 紗布 小剪子 小鑷子 大鑷子 大燒杯 平皿 研磨玻片 濾網 離心管 6 孔培養(yǎng)板 吸管 移液管 手套 微量加樣器

步驟

一、實驗步驟

1. 將小鼠斷頸致死,置 75%酒精泡2-3 秒鐘,取肝臟,置于盛有 PBS 的平皿中。
 
2. 剔除脂肪、結締組織、血液等雜物,轉移到另一個盛有 PBS 液的平皿中。
 
3. 用手術剪將臟器剪成小塊(大小約 1mm2),玻片研磨,轉到離心管,離心(1000 rpm,5 min)。
 
4. 視組織或細胞量加額加入5-6 倍(3-5  ml)胰酶,37℃中消化 20 分鐘,每隔 5 分鐘振蕩一次,或用吸 管吹打一次,使細胞分離。
 
5. 加入3-5 ml 含血清的培養(yǎng)液以中止胰酶消化作用。
 
6. 用100 目孔徑濾網濾過,除去未消化的大組織塊。
 
7. 再次離心5 min,棄上清液。
 
8. 加入無血清培養(yǎng)液5 ml,沖散細胞,再離心一次,棄上清液。
 
9. 加入含血清的培養(yǎng)液 1-2 ml (視細胞量),血球計數(shù)板計數(shù)。
 
10. 將細胞調整到5x105/ml 左右,轉移至6 孔培養(yǎng)板中,37℃下培養(yǎng)。
 

注意事項

1. 自取材開始,保持所有組織細胞處于無菌條件。細胞計數(shù)可在有菌環(huán)境中進行。

 

2. 在超凈臺中,組織細胞、培養(yǎng)液等不能暴露過久,以免溶液蒸發(fā)。

 

3. 凡在超凈臺外操作的步驟,各器皿需用蓋子或橡皮塞蓋住,以防止細菌落入。

 

4. 操作前要洗手,進入超凈工作臺后要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦拭手。試劑瓶口也要擦拭。

 

5. 點燃酒精燈,操作在火焰附近進行,耐熱物品要經常在火焰上燒灼。金屬器械燒灼時間不能太長,以免退火,且冷卻后才能夾取組織。吸取過營養(yǎng)液的用具不能再燒灼,以免燒焦形成碳膜。

 

6. 操作動作要準確敏捷,但又不能太快,以防空氣流動,增加污染機會。

 

7. 不能用手觸及消毒器皿的工作部分,工作臺面上的用品擺放要布局合理。

 

8. 瓶子開口后要盡量保持45°斜位。

 

9. 吸溶液的吸管等不能混用。


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安培生物科技有限公司介紹:

安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規(guī)模生物生產、基因和細胞治療領域客戶,提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產,包括培養(yǎng)間充質干細胞和多種免疫細胞系等,為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產服務;提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質膠產品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領域提供優(yōu)質的產品和技術服務,努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)。


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