原理
直接從生物體內獲取組織細胞進行的首-次培養(yǎng)稱為原代細胞培養(yǎng)。原代培養(yǎng)是建立各種細胞系的第一步,是從事培養(yǎng)工作的人員應熟悉和掌握的最基本的技術。根據培養(yǎng)方法不同分為組織塊培養(yǎng)法和單層細胞培養(yǎng)法。
材料與儀器
小鼠
DMEM DMEM 胰酶 PBS
飯盒 紗布 小剪子 小鑷子 大鑷子 大燒杯 平皿 研磨玻片 濾網 離心管 6 孔培養(yǎng)板 吸管 移液管 手套 微量加樣器
步驟
一、實驗步驟
注意事項
1. 自取材開始,保持所有組織細胞處于無菌條件。細胞計數(shù)可在有菌環(huán)境中進行。
2. 在超凈臺中,組織細胞、培養(yǎng)液等不能暴露過久,以免溶液蒸發(fā)。
3. 凡在超凈臺外操作的步驟,各器皿需用蓋子或橡皮塞蓋住,以防止細菌落入。
4. 操作前要洗手,進入超凈工作臺后要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦拭手。試劑瓶口也要擦拭。
5. 點燃酒精燈,操作在火焰附近進行,耐熱物品要經常在火焰上燒灼。金屬器械燒灼時間不能太長,以免退火,且冷卻后才能夾取組織。吸取過營養(yǎng)液的用具不能再燒灼,以免燒焦形成碳膜。
6. 操作動作要準確敏捷,但又不能太快,以防空氣流動,增加污染機會。
7. 不能用手觸及消毒器皿的工作部分,工作臺面上的用品擺放要布局合理。
8. 瓶子開口后要盡量保持45°斜位。
9. 吸溶液的吸管等不能混用。
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