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考馬斯亮藍(lán)G250和R250的區(qū)別

來源:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司   2023年01月05日 13:14  

有兩種考馬斯亮藍(lán):考馬斯亮藍(lán)G250和考馬斯亮藍(lán)R250。前者在結(jié)構(gòu)上比后者多兩個(gè)甲基。名字中的“G”是綠色的縮寫,因?yàn)榭捡R斯亮藍(lán)G250的藍(lán)色染料是淺綠色;名字中的“R”是紅色的縮寫,因?yàn)镽250的藍(lán)色染料是微紅的;


">“250”代表考馬斯亮藍(lán)R250的純度。在生化實(shí)驗(yàn)中,考馬斯亮藍(lán)R250常用在蛋白質(zhì)定量和蛋白質(zhì)電泳中的蛋白質(zhì)染色。


工作原理是:考馬斯亮藍(lán)R250經(jīng)過蛋白質(zhì)中氨基和羧基之間的靜電結(jié)合和范德華力與蛋白質(zhì)形成強(qiáng)但非共價(jià)連接的復(fù)合物。蛋白質(zhì)-染料復(fù)合物的形成穩(wěn)定了染料攜帶的帶負(fù)電荷的陰離子(例如磺酸基團(tuán)),從而在膜或膠上產(chǎn)生肉眼可見的藍(lán)色。

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考馬斯亮藍(lán)R250多用于電泳蛋白的染色,染色靈敏度相比氨基黑要高出5倍,可達(dá)0.1μg蛋白。考馬斯亮藍(lán)R250染色后,需要先褪色再觀察蛋白條帶。


考馬斯亮藍(lán)G250 盡然靈敏度較低,也可用作 R250 的替代品,是一種快速簡(jiǎn)便的蛋白質(zhì)染色方法。它具有以下特點(diǎn),即在pH 2.0以下,溶液為無色;pH 7.0 時(shí),溶液呈深藍(lán)黑色;如果酸化,溶液是透明的棕褐色。當(dāng) G250 與蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí),溶液恢復(fù)為藍(lán)色,這主要是由于蛋白質(zhì)分子周圍的 pH 值較中性。在合適的條件下,當(dāng)凝膠在酸化的 G250 溶液中染色時(shí),它顯示出藍(lán)色的蛋白質(zhì)條帶,帶有淺琥珀色背景。


此法條帶顯影快,底色也很淺,條帶看起來清晰,不需褪色。G250 對(duì)大多數(shù)蛋白質(zhì)的檢測(cè)下限為 0.5 g。 雖然靈敏度有所降低,但操作快捷方便,與R250 染色相比最多可節(jié)省 11 小時(shí)。


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