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平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基的應(yīng)用介紹
平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基是一個(gè)基于碳酸氫鹽的緩沖體系，可以在孵育的5%的CO?的氣體環(huán)境下維持一個(gè)圍繞pH7.2的酸堿緩沖體系。本體系是一個(gè)無(wú)菌的液體混合系統(tǒng)，其中包含必須和非必須氨基酸、維生素、激素、生長(zhǎng)因子、微量元素和一些其他的有機(jī)和無(wú)機(jī)化合物以及胎牛血清(10%)。
平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基SMCM可用于平滑肌細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)：
以25cm2(50ml)一次性培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞在經(jīng)過(guò)消化傳代后明顯較原代胖大，細(xì)胞可自行沿一定方向生長(zhǎng)，表現(xiàn)為峰谷樣圖案。平滑肌細(xì)胞隨著傳代次數(shù)增多，體積會(huì)逐漸增大，突觸明顯并逐漸喪失梭形結(jié)構(gòu)，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密集時(shí)，擁擠的細(xì)胞逐層環(huán)繞，中心可隆起呈結(jié)節(jié)狀。將酶消化法獲得的細(xì)胞傳代至第3代，分別以平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基SMCM或含10%新生牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基(10%-F12)進(jìn)行培養(yǎng)，及時(shí)記錄細(xì)胞生長(zhǎng)情況。以每孔2000個(gè)細(xì)胞為標(biāo)準(zhǔn)將第3代平滑肌細(xì)胞接種于96孔板內(nèi)，每個(gè)樣本需重復(fù)3～4個(gè)輔助測(cè)量孔。將96孔板靜置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)，6小時(shí)后觀察細(xì)胞貼壁、舒展。以每100μl培養(yǎng)基加10μlCCK-8試劑的比例配置混懸劑。清除各待測(cè)孔培養(yǎng)基后，每孔加入混懸劑100μl。將96孔板靜置于培養(yǎng)箱內(nèi)2h后取出，置于微孔板振蕩器上震蕩1min，將96孔板轉(zhuǎn)至酶標(biāo)儀，在450nm波長(zhǎng)下讀取各孔數(shù)據(jù)并記錄。測(cè)量吸光值后的孔不再重復(fù)使用。每24h測(cè)量一次實(shí)驗(yàn)孔吸光值，連續(xù)測(cè)量9天(216h)。觀察結(jié)果。
使用該培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)注意將基礎(chǔ)介質(zhì)儲(chǔ)存在4℃，將SMCGS、FBS和P/S溶液儲(chǔ)存在-20℃。避光保存。
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