流式細(xì)胞術(shù)是一種對(duì)溶液中單個(gè)細(xì)胞或顆粒進(jìn)行快速、多參數(shù)分析的技術(shù)。流式細(xì)胞儀利用激光作為光源，照射在細(xì)胞上，產(chǎn)生散射光和熒光信號(hào)，由檢測(cè)器如光電二極管或光電倍增管讀取。之后，這些信號(hào)被轉(zhuǎn)換成電子信號(hào)，由計(jì)算機(jī)進(jìn)行分析，并寫(xiě)入標(biāo)準(zhǔn)格式(.fcs)數(shù)據(jù)文件。另外，細(xì)胞群可以根據(jù)其熒光或散射光的特性進(jìn)行分析或分選。

用于流式細(xì)胞術(shù)的儀器在過(guò)去的幾十年里不斷“進(jìn)化”著，以滿足越來(lái)越多的科研與臨床應(yīng)用需求。本文將為大家簡(jiǎn)單介紹幾種流式細(xì)胞儀。

傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀

傳統(tǒng)的流式細(xì)胞儀由液流、光學(xué)和電子（檢測(cè)分析）三個(gè)系統(tǒng)組成。

液流系統(tǒng)

液流系統(tǒng)主要由鞘液(通常是一種緩沖鹽水溶液)構(gòu)成。在一定壓力下，鞘液將細(xì)胞或顆粒聚焦在一條直線，并將其輸送到激光攔截點(diǎn)。

光學(xué)系統(tǒng)

學(xué)系統(tǒng)由激發(fā)光 (激光器)和收集光 (光電倍增管或PMTs和光電二極管)組成，產(chǎn)生用于分析樣品的散射光和熒光信號(hào)。一系列的雙色向?yàn)V光片可引導(dǎo)熒光到特定的探測(cè)器，以便每一個(gè)單獨(dú)的熒光色素可以被檢測(cè)和測(cè)量。更具體地說(shuō)，雙色向?yàn)V光片只允許波長(zhǎng)較短或較長(zhǎng)的光通過(guò)，并以一定角度反射不能通過(guò)的光。例如，450雙色向長(zhǎng)通濾光片(DLP)讓波長(zhǎng)大于450 nm的光通過(guò)濾光片，并以一定角度反射較短波長(zhǎng)的光，發(fā)送到另一個(gè)探測(cè)器。帶通濾光片只允許一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)的熒光通過(guò)。例如，450/50帶通濾光片只允許波長(zhǎng)為450 +/- 25 nm的熒光通過(guò)。

電子系統(tǒng)

電子系統(tǒng)將探測(cè)器發(fā)出的信號(hào)轉(zhuǎn)換成可以被計(jì)算機(jī)讀取的數(shù)字信號(hào)。

常見(jiàn)的多激光系統(tǒng)通常有20個(gè)參數(shù)(FSC, SSC和18個(gè)熒光探測(cè)器)。目前，一些新的儀器正在引入5個(gè)或更多的激光器，并設(shè)置30-50個(gè)參數(shù)，但這并不常見(jiàn)。傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀使用的常見(jiàn)的激光是488 nm(藍(lán)色)、405nm(紫色)、532nm(綠色)、552nm(綠色)、561 nm(綠)、640 nm(紅色)和355 nm(紫外線)，還有一些不常見(jiàn)的激光可用于特定用途。此外，還有一些儀器已經(jīng)用電子崩光電二極管(APD)取代光電倍增管(PMT)用于熒光檢測(cè)，目的是提高檢測(cè)的靈敏度。

聲波聚焦流式細(xì)胞儀

聲波聚焦流式細(xì)胞儀可以使用超聲波更好地將細(xì)胞聚焦于一條直線，進(jìn)行激光照射。即使在較高的進(jìn)樣速度下，聲波聚焦技術(shù)也可以精確地將細(xì)胞定位在液流的中心，因此細(xì)胞信號(hào)的變異系數(shù)較小，數(shù)據(jù)質(zhì)量更高。作為對(duì)比，同樣在高進(jìn)樣速度下，傳統(tǒng)的流體動(dòng)力學(xué)聚焦由于鞘液壓力相對(duì)變小，樣本流的中心部分變寬，導(dǎo)致信號(hào)變異系數(shù)增大、數(shù)據(jù)質(zhì)量下降。此外，聲波聚焦的方式允許更高的上樣量，并能夠減少樣品堵塞。聲波聚焦流式細(xì)胞儀可以利用多達(dá)4種激光和14個(gè)熒光通道對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)。

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