一操作流程：

1、您收到PANC-1人胰腺癌細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作:

2、取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜，放入37C，5%C02細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。

二、細(xì)胞傳代:

1)細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一 -次;

2)2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將

3)棄上清，沉淀細(xì)胞用12mI*培養(yǎng)基重懸,然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，放入37C, 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

4)待細(xì)胞帖壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。

三、細(xì)胞凍存:

1)細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞- -次;

1)細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞- -次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸

3)用適量的凍存液(FBS: DMSO=9: 1)重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中;

4)先將細(xì)胞凍存管放置于-20口1.5h, 然后將其移入-80C過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80C。

四、細(xì)胞復(fù)蘇:

1)從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具) ,快速將其置入37C水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外

2)將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15m離心管中，1000rpm離心5min;

3)棄.上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37C，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

4)第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

以上是上海通蔚生物就細(xì)胞培養(yǎng)操作流程詳細(xì)介紹，希望對(duì)您有所幫助。