RAW 264.7(小鼠單核巨噬細胞白血病細胞)是破骨細胞、炎癥研究最-常用的體外模型之一,被廣泛用于研究風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、骨質(zhì)溶解、牙周炎等骨骼疾病。
極化方式
巨噬細胞是具有異質(zhì)性的一類免疫細胞,在體內(nèi)外不同環(huán)境影響下可極化為不同表型參與機體生理、病理反應(yīng)。從激活方式上分為經(jīng)典激活的巨噬細胞M1和選擇性激活的巨噬細胞M2。
細菌和脂多糖(LPS)可以誘導(dǎo)巨噬細胞向M1型分化,產(chǎn)生促炎細胞因子,抵抗病原入侵,但也會造成機體損傷,在實驗中可采用2.5ng/mL IFN-γ和200ng/mL LPS共同作用12小時誘導(dǎo)其極化;

圖1. a.RAW 264.7 未分化形態(tài)圖 b.RAW 264.7 M1型分化形態(tài)圖
白細胞介素(IL-4)可以誘導(dǎo)巨噬細胞向M2型分化,分泌抗炎細胞因子,并在組織修復(fù)與重建和腫瘤的形成過程中發(fā)揮作用,在實驗中可采用10ng/mL IL-4作用12小時誘導(dǎo)其極化。

圖2. RAW 264.7 不同分型形態(tài)圖
鑒定方法
M1、M2具有各自特征性標(biāo)志分子,iNOS、CD86、TNF-α是常見的M1型巨噬細胞的標(biāo)志分子,IL-10、Arg-1、CD206是常見的M2型巨噬細胞標(biāo)志分子。一般在實驗研究中:
WB可以分析RAW264.7細胞iNOS、YM-1和Arg-1的表達水平(如圖3);

圖3. WB分析照射對IL-4誘導(dǎo)的RAW264.7細胞YM-1和Arg-1的表達影響
流式細胞術(shù)(FCM)可以分析RAW264.7細胞表面CD86和CD206的表達(如圖4);

圖4. 流式細胞術(shù)分析照射對IL-4誘導(dǎo)的小鼠RAW264.7細胞CD206和CD209的表達
實時定量 PCR 和 ELISA 可以分析IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12 及 IL-10 等細胞因子的表達及分泌(如圖5);

圖5. 用于實時熒光定量PCR的引物序列
Griess reagent 可以分析細胞培養(yǎng)上清 NO 生成(如圖6)。

圖6. 不同樣品對RAW 264.7中NO產(chǎn)生的影響
參考文獻
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。