熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒的原理在于PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；剛開始時(shí), 探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成wan全同步?；蛘呤褂脽晒馊玖蟂YBR。SYBR可以結(jié)合到雙鏈DNA上面，當(dāng)體系中的模板被擴(kuò)增時(shí)，SYBR可以有效結(jié)合到新合成的雙鏈上面，隨著PCR的進(jìn)行，結(jié)合的SYBR染料越來越多，被儀器檢測(cè)到的熒光信號(hào)越來越強(qiáng)，從而達(dá)到定量的目的。接下來小編簡(jiǎn)單為大家介紹一下熒光探針法的相關(guān)信息。

   zui常用于熒光免疫法中標(biāo)記抗原或抗體，亦可用于微環(huán)境，如表面活性劑膠束、雙分子膜、蛋白質(zhì)活性位點(diǎn)等處微觀特性的探測(cè)。通常要求探針的摩爾吸光系數(shù)大，熒光量子產(chǎn)率高；熒光發(fā)射波長(zhǎng)處于長(zhǎng)波且有較大的斯托克斯位移；用于免疫分析時(shí)，與抗原或抗體的結(jié)合不應(yīng)影響它們的活性。

   目前常用的熒光探針有熒光素類探針、無機(jī)離子熒光探針、熒光量子點(diǎn)、分子信標(biāo)等。熒光探針除應(yīng)用于核酸和蛋白質(zhì)的定量分析外，在核酸染色、DNA電泳、核酸分子雜交、定量PCR技術(shù)以及DNA測(cè)序上都有著廣泛的應(yīng)用。

   目前，檢測(cè)熒光探針的方法主要有單點(diǎn)測(cè)定和電荷耦合裝置（CCD）熒光成像（包括用于微區(qū)分析的激光共聚焦熒光顯微鏡成像）。由于光電倍增管點(diǎn)掃描時(shí)間較長(zhǎng)，激光照射強(qiáng)度高，很難抓住熒光早期變化。而CCD熒光成像的面陣大，成像視野廣，成像時(shí)間可以調(diào)節(jié)，因而檢測(cè)效果比較好。

   化學(xué)發(fā)光檢測(cè)的zui大特點(diǎn)是設(shè)備簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便、分析速度快及靈敏度高。化學(xué)發(fā)光成像分析(CLI)是將化學(xué)發(fā)光與成像技術(shù)相結(jié)合，從而具有分辨率高、多樣品同時(shí)檢測(cè)、光譜響應(yīng)范圍寬以及靈敏度高等特點(diǎn)[10,11]，已廣泛應(yīng)用于凝膠、蛋白印記及微陣列芯片中的化學(xué)發(fā)光信號(hào)檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)建立了TCPO?咪唑?H2O2?熒光探針化學(xué)發(fā)光成像體系。由于化學(xué)發(fā)光不需要任何光源，因而在對(duì)熒光探針進(jìn)行化學(xué)發(fā)光成像檢測(cè)時(shí)，不存在熒光檢測(cè)或者熒光成像時(shí)不可避免的光學(xué)背景的干擾，從而可以獲得更低的檢出限。用此體系對(duì)5種熒光探針進(jìn)行定量分析，并研究了用四甲基異硫氰酸羅丹明（TRITC）標(biāo)記的單克隆羊抗人IgG的化學(xué)發(fā)光成像，檢出限達(dá)10－11mol/L，比相同條件下熒光成像的檢出限低一個(gè)數(shù)量級(jí)。