核酸分子大小與瓊脂糖濃度的關(guān)系
(1)DNA分子的大小 在凝膠中,DNA片段遷移距離(遷移率)與堿基對(duì)的對(duì)數(shù)成反比,因此通過已知大小的標(biāo)準(zhǔn)物移動(dòng)的距離與未知片段的移動(dòng)距離時(shí)行比較,便可測出未知片段的大小。但是當(dāng)DNA分子大小超過20kb時(shí),普通瓊脂糖凝膠就很難將它們分開。此時(shí)電泳的遷移率不再依賴于分子大小,因此,就用瓊脂糖凝膠電泳分離DNA時(shí),分子大小不宜超過此值。
(2)瓊脂脂糖的濃度 如下所示,不同大小的DNA需要用不同濃度的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分離。
瓊脂糖濃度與DNA分離范圍
瓊脂糖濃度 /% 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0
線狀DNA大小/kb60-520-110-0.87-0.56-0.44-0.23-0.1
如何選擇瓊脂糖凝膠的濃度來分離DNA
總體原則是:分子量大的DNA,電泳時(shí)使用濃度較小的凝膠反之亦反。膠濃度越大,電泳速度越?。蝗裟z濃度偏高,可能跑不動(dòng),條帶縮在一起;若膠濃度過低,可能跑得太快,同樣分不開??蓞⒖枷旅娴膶?duì)應(yīng)關(guān)系:
凝膠濃度(%) 線性DNA長度(bp)
0.5 1000~30000
0.7 800~12000
1.0 500~10000
1.2 400~7000
1.5 200~3000
2.0 50~2000
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