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高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。
如果高效液相色譜儀的檢測(cè)器是紫外檢測(cè)器，首先確保樣品具有紫外吸收。如果沒(méi)有紫外吸收，可以選擇熒光檢測(cè)器、蒸發(fā)檢測(cè)器等?？傊枰獦悠返闹饕煞衷跈z測(cè)器上有一個(gè)響應(yīng)信號(hào)。
高效液相色譜儀測(cè)試前，應(yīng)將樣品制備成一定濃度的溶液（制備溶液時(shí)，應(yīng)根據(jù)樣品的溶解度選擇合適的溶劑。為了減少溶劑峰，通常使用流動(dòng)相作為溶劑，樣品溶液的濃度通常制備為約10微克/毫升）。如果樣品溶解良好且沒(méi)有其他雜質(zhì)，樣品溶液可直接吸入注射。如果樣品中有其他成分，例如，當(dāng)測(cè)定口服藥物制劑中成分的含量時(shí)，口服藥物制劑中通常有其他輔料，樣品溶液在注射前應(yīng)進(jìn)行過(guò)濾（通常使用0.22um或0.45um針頭過(guò)濾器）
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