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組織細胞RNA提取試劑盒如何提取

來源:北京眾仁鑫商貿(mào)有限公司   2023年02月23日 10:49  
組織細胞RNA提取試劑盒可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A篩選、體外翻譯、構(gòu)建cDNA文庫等各種分子生物學(xué)實驗。
特點:
無污染:整套試劑盒采用RNase-Free處理。
特殊性:適用于提取動物組織和培養(yǎng)細胞總RNA。
易操作:操作簡便,提取過程僅需30分鐘左右。
安全性:無需使用苯酚、氯仿等有機試劑。
吸附柱:含有特異性吸附柱。通過漂洗-離心-洗脫的步驟提取。
高質(zhì)量:有效保證RNA的完整性,回收RNA效率高,純度高,沒有蛋白和其他雜質(zhì)污染。OD260/OD280的比值可達1.9~2.2,可用于各種分子生物學(xué)實驗。
提取步驟:
1.將處理后的樣品在室溫靜置5~10分鐘,13000rpm離心3分鐘,會有雜質(zhì)沉淀。
2.將上清液轉(zhuǎn)入套有基因組DNA清除柱的離心管中。不要吸取、沉淀物和漂浮物。漂浮物可能會黏附在槍頭的外壁,注意不能將其帶入離心管中。)
3.13000rpm離心60秒,保留濾過液(RNA在濾過液中)。
4.估計濾過液體積,加入等體積的70%乙醇(請先檢查是否已加入無水乙醇)立即吹打混勻。
5.將混合溶液(每次小于700μl)滴入套有吸附柱RA的離心管中,13000rpm離心30秒,棄掉廢液。
6.加700μl去蛋白液RW1,室溫放置1分鐘,12000rpm離心30秒,棄掉廢液。
7.加500μl漂洗液RW(請先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm離心30秒,棄掉廢液。
8.重復(fù)步驟7一次。
9.將吸附柱RA放回收集管中,13000rpm離心2分鐘,盡量除去漂洗液,以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
10.取出吸附柱RA(避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的廢液),放入新的RNase-free離心管中,在吸附膜的中間部位加30-50μl RNase-free H2O室溫放置1分鐘,12000rpm離心1分鐘。洗脫后的RNA可立即使用或保存在-80°C。

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