哈嘍,上期小編帶領(lǐng)大家簡(jiǎn)單了解了下高效液相色譜和超高效液相色譜的差異,相信大家通過小編的介紹對(duì)兩者有了比較具體的了解。那么隨著小粒徑色譜柱的發(fā)展,越來越多的業(yè)內(nèi)人士期望使用亞2μm粒徑色譜柱的超高效液相色譜來拓寬選擇性、提高工作效率、降低耗能、減少污染。
今天小編就帶領(lǐng)大家看下如何將HPLC方法轉(zhuǎn)換為UHPLC方法。
1
保證轉(zhuǎn)換成功的前提
● 相同的選擇性:選擇相同品牌,相同鍵合工藝制成的填料僅僅是粒徑不一致。
● 相同或者更大的柱長(zhǎng)粒徑比:這是保證具有相當(dāng)或者更高的理論塔板數(shù)。
2
方法如何轉(zhuǎn)換
● 針對(duì)兩者差異進(jìn)行轉(zhuǎn)換研究:色譜柱填料粒徑不同,系統(tǒng)體積不同,儀器輸送流動(dòng)相系統(tǒng)內(nèi)徑不同,影響流速,進(jìn)樣量,梯度洗脫程序。
● 需要調(diào)整參數(shù):流速,進(jìn)樣量,梯度洗脫程序。
1. 流速與柱半徑的平方成正比
例如:
HPLC柱:4.6*150mm,5μm 流速:1.5mL/min
UHPLC柱:2.1*100mm,1.8μm流速則為:

2. 樣品濃度不改變,進(jìn)樣體積與柱體積成正比
例如:
HPLC柱:4.6*150mm,5μm 進(jìn)樣體積:20μL
UHPLC柱:2.1*100mm,進(jìn)樣體積則為:

3. 梯度洗脫程序的轉(zhuǎn)換
等度方法只需要調(diào)整流速和進(jìn)樣量,如果是梯度洗脫則需調(diào)整梯度洗脫程序。調(diào)整的依據(jù),需計(jì)算在幾何縮放的流速下輸送相同倍數(shù)柱體積溶劑到目標(biāo)柱需要的時(shí)間。

同時(shí),由于不同儀器之間系統(tǒng)體積存在差異,也需要在轉(zhuǎn)換時(shí)加以考慮。梯度程序轉(zhuǎn)換的計(jì)算過程這里不做詳細(xì)描述。通常色譜儀器均配備轉(zhuǎn)換軟件,輸入原始洗脫程序,軟件可自動(dòng)計(jì)算并轉(zhuǎn)換為目標(biāo)儀器的洗脫,然后根據(jù)色譜峰分離情況進(jìn)行人工微調(diào)。
3
方法參數(shù)的優(yōu)化
1. 改善分離度:調(diào)整梯度洗脫程序,增加長(zhǎng)度是便捷可行的措施;
2. 如果破壞試驗(yàn)檢測(cè)的雜質(zhì)情況不一致,轉(zhuǎn)換后的雜質(zhì)多且物料平衡優(yōu)于前者,兩者測(cè)定結(jié)果沒有明顯區(qū)別,轉(zhuǎn)換成功;
3. 如果結(jié)果明顯不一致,或涉及不合格情況,應(yīng)匯報(bào)相關(guān)負(fù)責(zé)人,是否需要對(duì)原方法進(jìn)行再評(píng)估或放棄方法轉(zhuǎn)換。
4
什么時(shí)候?yàn)檗D(zhuǎn)換失敗
1. 原則:系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)不符合要求;
2. 分離度調(diào)整后達(dá)不到要求;
3. 破壞性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)出來物料平衡明顯不如HPLC法,方法優(yōu)化后不能解決;
4. 檢測(cè)結(jié)果與HPLC不一致,甚至出現(xiàn)不合格,那需要對(duì)原方法進(jìn)行評(píng)估或者放棄方法轉(zhuǎn)換。
5
UHPLC轉(zhuǎn)換方法需要驗(yàn)證的項(xiàng)目
1. 原則:系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)符合要求;
2. 峰純度達(dá)到要求;
3. 分離度達(dá)到要求;
4. 靈敏度達(dá)到要求;
5. 沒有系統(tǒng)適用性要求的項(xiàng)目進(jìn)行樣品2-3種條件的破壞性實(shí)驗(yàn),雜質(zhì)分離和物料平衡均要相當(dāng)。
在日常工作中,當(dāng)HPLC方法成功轉(zhuǎn)換為UHPLC方法后,不僅僅拓寬選擇性和提高工作效率,還降低耗能以及減少了污染。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。