肺血管疾病的研究涉及多種方法來探索影響疾病的細(xì)胞和分子程序[1，2]。肺血管從胚胎期開始發(fā)育，并在出生后繼續(xù)。肺的支管網(wǎng)絡(luò)由內(nèi)皮細(xì)胞和支持細(xì)胞組成。為了更好地了解血管疾病，科學(xué)家研究了形成肺血管的細(xì)胞，以及那些有助于血管修復(fù)的細(xì)胞[1，2]。

由于管狀結(jié)構(gòu)，以及肺標(biāo)本很容易有數(shù)百微米厚，因此可視化內(nèi)皮細(xì)胞和支持細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)的發(fā)育以及血管系統(tǒng)的維持jiju挑戰(zhàn)。此處的報(bào)告結(jié)果展示了如何使用THUNDER Imager 3D Cell Culture顯微鏡，在小鼠肺組織中有效研究肺血管疾病的機(jī)制[3，4]。

在肺組織成像時(shí)想要獲得真實(shí)結(jié)果，擁有一種可以快速獲取高對(duì)比度三維圖像的解決方案非常關(guān)鍵，確保其中的重要細(xì)節(jié)得到清晰呈現(xiàn)。傳統(tǒng)的寬場(chǎng)顯微鏡能夠?qū)@些厚標(biāo)本的大面積成像，這種顯微鏡速度快，檢測(cè)靈敏度高，但由于非焦信號(hào)的干擾，圖像模糊，對(duì)比度顯著降低[3，4]。

使用THUNDER Imager 3D Cell Culture顯微鏡對(duì)小鼠肺部標(biāo)本進(jìn)行成像。使用FITC、Cy3以及Alexa 633對(duì)標(biāo)本進(jìn)行免疫染色。為了可視化整個(gè)肺組織標(biāo)本，使用20x Plan Fluo Apo 0.4 NA（數(shù)值孔徑）物鏡以及三個(gè)熒光通道。為覆蓋280µm厚度的樣品，采集的圖像顯示為由115層光學(xué)切片組成的擴(kuò)展景深（EDoF）投影。

THUNDER Imager 3D Cell Culture可以快速獲取肺組織的三維圖像，然后通過Instant Computational Clearing（ICC）技術(shù)去除寬場(chǎng)圖像中會(huì)降低對(duì)比度的模糊信號(hào)（參見圖1）[3，4]。ICC可以呈現(xiàn)肺組織圖像中的精細(xì)結(jié)構(gòu)和細(xì)胞水平分辨率，以研究影響肺血管疾病的發(fā)育、維持和修復(fù)活動(dòng)[1，2]。

整個(gè)組織圖像采集時(shí)間約1min（參見圖1）。