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從四個(gè)方面探討熒光素酶發(fā)光成像技術(shù)的具體內(nèi)容
熒光素酶發(fā)光成像是一種廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究的成像技術(shù)，其具有較高的靈敏度和選擇性，能夠在活體內(nèi)、細(xì)胞內(nèi)以及分子水平上實(shí)現(xiàn)可視化成像。本文將從作用、原理、特點(diǎn)以及選型標(biāo)準(zhǔn)四個(gè)方面探討熒光素酶發(fā)光成像技術(shù)的具體內(nèi)容。
一、作用
熒光素酶（Luciferase）是一種廣泛存在于生物界的酶類，在一些動(dòng)物中起到生物熒光作用，熒光素酶發(fā)光成像技術(shù)利用熒光素酶與熒光素底物（Luciferin）的反應(yīng)，產(chǎn)生強(qiáng)烈的熒光信號(hào)，以實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)區(qū)域的定量及定位等高分辨率成像。
二、原理
熒光素酶的反應(yīng)原理是熒光素底物與ATP在熒光素酶的催化下進(jìn)行氧化反應(yīng)，生成二氧化碳、AMP和氧化熒光素，并釋放出能量。氧化熒光素激發(fā)的熒光光子可以經(jīng)過(guò)吸收器淬滅，也可以導(dǎo)致染料重新激發(fā)和發(fā)光，之后通過(guò)成像設(shè)備記錄下來(lái)。
三、特點(diǎn)
1、靈敏度
熒光素酶發(fā)光成像具有較高的檢測(cè)靈敏度，其能夠偵測(cè)到相對(duì)較弱的熒光發(fā)光，能夠提供高分辨率的熒光圖像。
2、高度選擇性
熒光素酶發(fā)光成像對(duì)絕大多數(shù)背景熒光有很好的區(qū)分度，使其可以獲得非常高的檢測(cè)信噪比。
3、實(shí)時(shí)性高
熒光素酶發(fā)光成像能夠以非常高的速度捕捉熒光事件，從而使熒光素酶標(biāo)記物的變化能夠?qū)崟r(shí)呈現(xiàn)在屏幕上。
四、選型標(biāo)準(zhǔn)
在使用熒光素酶發(fā)光成像技術(shù)時(shí)，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的熒光素酶種類和底物。
1、熒光素酶種類選擇
熒光素酶有多種不同的種類，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜆颖绢愋瓦x擇合適的熒光素酶。例如，F(xiàn)irefly熒光素酶對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞較為適用，但對(duì)歐文斯毒蛇等其它生物的檢測(cè)靈敏度較低。因此，在選擇熒光素酶種類時(shí)，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求和樣本類型選擇合適的種類。
2、熒光素底物的選擇
熒光素底物分為自發(fā)熒光和非自發(fā)熒光兩種，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的熒光素底物。自發(fā)熒光底物能夠極大提高檢測(cè)的靈敏度，但在嵌合蛋白的檢測(cè)中，熒光素底物的自發(fā)熒光會(huì)對(duì)測(cè)量的結(jié)果產(chǎn)生影響，因此應(yīng)選擇非自發(fā)熒光底物。
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