1.細(xì)菌繁殖:LB培養(yǎng)基,2ml / 20ml,37℃,200rpm,搖動過夜;
2.離心10分鐘,轉(zhuǎn)速為5000 rpm,4°C;丟棄液體;
3.用預(yù)冷的TES緩沖液洗滌沉淀物(細(xì)胞),在4°C下以10 rpm,5 000 rpm離心10分鐘,加入預(yù)冷的1 ml溶液I,并冰浴10分鐘;
4.重懸,加入150ul溶菌酶母液,在室溫下靜置5分鐘;
5.添加1.2ml的溶液II并在冰浴上保持5分鐘;
6.加入0.9 ml預(yù)冷的乙酸鉀,混合均勻,在4°C下以12 000 rpm離心10分鐘;
7.加入1.5 ml異丙醇,并將其放在-20°C的冰箱中放置15分鐘;
8.在4°C下以12 000 rpm離心10分鐘;
9.取沉淀并將其懸浮在400 ul TE緩沖液中;
10.添加40ul 3M NaAc;
11.phenol/Trichloromethane,萃取,乙醇沉淀;
12.在4°C下以12 000 rpm離心10分鐘;
13.取出沉淀物,將其冷凍干燥,然后重懸于50ul TE緩沖液中;
14.電泳檢測提取的DNA的質(zhì)量。
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