1、 加被檢抗原(重組蛋白或自然樣品):用稀釋液(DS01、AS01、AS02、AS03、AS04)將被檢抗原按實驗設(shè)計稀釋,每孔100µl,同時用稀釋液作空白對照。封板膜封板,室溫放置兩小時。
2、 洗滌:到盡板孔中的液體,加滿洗滌液(WS03),靜止放十秒,洗四次,后在毛巾或吸水紙上拍干板子:
3、 加檢測抗體:將生物素標記的檢測抗體稀釋適當(dāng)濃度(稀釋液DS01),每孔100 µl封板膜封板,室溫放置一小時:
4、 洗滌:到盡板孔中的液體,加滿洗滌液(WS03),靜止放十秒,洗四次,后在毛巾或吸水紙上拍干板子:
5、 加親和素-辣根過氧化酶(HRP)稀釋適當(dāng)濃度(稀釋液HD01)每孔100µl,封板膜封板,室溫放置30分鐘:
6、 加底物:新鮮配制的四甲基聯(lián)苯胺溶液(TMB),每孔100µl,室溫暗處放置30分鐘:
7、 加終止液(SS01):每孔100µl,立即讀值:
8、 觀察結(jié)果:用酶標儀記錄450nm讀數(shù).
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