培養(yǎng)細胞的重要環(huán)節(jié)有很多，其中很重要的一步就是為細胞選擇適合的生長環(huán)境，為其選擇成分適合又營養(yǎng)豐富的細胞培養(yǎng)基。細胞培養(yǎng)基是供給細胞營養(yǎng)、維持細胞生長和增殖的多種營養(yǎng)物質(zhì)的混合物，種類一般包括基礎培養(yǎng)基、無血清培養(yǎng)基以及化學成分確定的培養(yǎng)基等。這其中又以基礎培養(yǎng)基最為常用?；A培養(yǎng)基屬于合成培養(yǎng)基，是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化學物質(zhì)模擬合成、人工設計、配制的培養(yǎng)基，其主要成分有氨基酸、碳水化合物、無機鹽、維生素及其他輔助成分，比如 DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12，這些都是應用非常廣泛的基礎細胞培養(yǎng)基。

一些培養(yǎng)基以及適用的細胞類型：

1.RPMI-1640 Medium：

RPMI-1640廣泛應用于哺乳動物、特殊造血細胞、正?；驉盒栽錾陌准毎?，雜交瘤細胞的培養(yǎng)，是目前應用十分廣泛的培養(yǎng)基。主要用于懸浮細胞培養(yǎng)。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細胞、T細胞淋巴瘤細胞以及HCT-15上皮細胞等均可參考使用。

2.Minimum Essential Medium（MEM）：

也稱必需培養(yǎng)基，它僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素。成分簡單，可廣泛適應各種已建成細胞系和不同地方的哺乳動物細胞類型的培養(yǎng)。MEM-Alpha一般用于培養(yǎng)一些難培養(yǎng)細胞類型，而其它沒有特殊之處的細胞株則幾乎均可采用MEM來培養(yǎng)。

3.DMEM-高糖（標準型）：

是一種應用十分廣泛的培養(yǎng)基，可用于許多哺乳動物細胞培養(yǎng),更適合高密度懸浮細胞培養(yǎng)。適用于附著性較差，但又不希望它脫離原來生長點的克隆培養(yǎng)，也可用于雜交瘤中骨髓瘤細胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細胞的培養(yǎng)。

4.DMEM-低糖（標準型）：

是一種應用十分廣泛的培養(yǎng)基，可用于許多哺乳動物細胞培養(yǎng)。低糖適于依賴性貼壁細胞培養(yǎng)，特別適用于生長速度快、附著性較差的腫瘤細胞培養(yǎng)。

5.DMEM/F12：

DMEM/F12培養(yǎng)基適于克隆密度的培養(yǎng)。F12培養(yǎng)基成分復雜，含有多種微量元素，和DMEM以1:1結合，稱為DMEM/F12培養(yǎng)基（DME/F12medium），作為開發(fā)無血清配方的基礎，以利用F12含有較豐富的成分和DMEM含有較高濃度的營養(yǎng)成分為優(yōu)點。該培養(yǎng)基適用于血清含量較低條件下哺乳動物細胞培養(yǎng)。為了增強該培養(yǎng)基的緩沖能力，改良之一是在DMEM/F12（1:1）中加入15mM HEPES緩沖液。

在確定培養(yǎng)基種類后，還會遇到培養(yǎng)基有不同分型的情況。那么對于經(jīng)典培養(yǎng)基中不同成分的作用及選擇原則又是什么呢？

1.葡萄糖（Glucose）：

作用：細胞生長所需的主要能量來源。

如何選擇不同葡萄糖含量的培養(yǎng)基？

1.最初的 DMEM 中，葡萄糖濃度為 1 g/L，現(xiàn)在稱其為低糖型 DMEM，適合培養(yǎng)多數(shù)哺乳動物細胞；
2.高糖型 DMEM 中的葡萄糖濃度為 4.5 g/L，適合生長速度快，附著性較差的腫瘤細胞；
3.使用無糖培養(yǎng)基的主要目的是，通過控制細胞的能量來源，研究細胞的代謝過程或葡萄糖利用效率。

2.HEPES：

作用：pH 緩沖劑。

1.是一種氫離子緩沖劑，其作用不依賴于 CO2；
2.在一定范圍內(nèi)對細胞無毒性作用，能較長時間控制恒定的 pH 范圍，保證細胞良好生長；
3.部分細胞對酸堿度的變化非常敏感，建議使用 HEPES；
4.根據(jù)需要，非必需。

3.L-谷氨酰胺（L-glutamine）：

作用：L-谷氨酰胺是一種氨基酸，細胞的重要能量來源，參與蛋白質(zhì)的合成，也為合成核酸提供碳源。

不足：

1.L-谷氨酰胺不穩(wěn)定，在中性的水溶液中會自發(fā)降解；
2.降解產(chǎn)物氨對細胞有毒性；
3.對氨敏感的細胞（如干細胞和原代細胞等）或培養(yǎng)環(huán)境（高密度反應器，無補料的長期培養(yǎng)）不推薦含 L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基。

解決方案：

1.選擇不含谷氨酰胺的培養(yǎng)基，在使用前再添加 L-谷氨酰胺，并盡快用完；
2.選擇穩(wěn)定的谷氨酰胺替代物，如 glutaGRO™。

4.酚紅（Phenol red）：

作用：pH 值的指示劑（中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色）。

何時選擇不含酚紅的培養(yǎng)基？

1.培養(yǎng)干細胞或細胞克隆時傾向于不加酚紅；
2.酚紅可以模擬固醇類激素的作用（特別是雌激素）；
3.酚紅的顏色會干擾流式檢測，不建議使用含酚紅的培養(yǎng)基制備細胞樣品（通常用 PBS）。

5.碳酸氫鈉（Sodium bicarbonate）：

作用：pH 緩沖劑。

1.pH 6.8~7.8 為細胞生長的最佳 pH 條件；
2.多數(shù)培養(yǎng)基利用碳酸氫鈉進行緩沖；
3.碳酸氫鈉的緩沖需要 CO2；
 

高碳酸氫鈉(1.5~3.7 g/L)需要 5~10% CO2 培養(yǎng)；低碳酸氫鈉（0.35 g/L）不需要 CO2 培養(yǎng)。

干粉培養(yǎng)基在配制時需要單獨添加。

6.丙酮酸鈉（Sodium pyruvate）：

作用：能量來源。

1.丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源；
2.葡萄糖不足的時候，細胞可以代謝丙酮酸鈉；
3.保證細胞更好地生長；
4.根據(jù)需要，非必需組分。