1.多肽文庫(kù)篩選概念

多肽文庫(kù)是指大量特定長(zhǎng)度且序列不同的小肽的集合,它包括了該長(zhǎng)度短肽中各種(或絕大部分)氨基酸序列的排列組合。多肽文庫(kù)是一種強(qiáng)大的篩選工具。它用于從大批量多肽中篩選極少量具有關(guān)鍵生物活性的多肽。

2.多肽文庫(kù)類型

（1）重疊肽庫(kù)：單個(gè)肽可以分成幾個(gè)重疊的片段。由此產(chǎn)生的重疊肽庫(kù)隨后可用于包括連續(xù)和線性表位作圖在內(nèi)的過(guò)程。

（2）截斷肽庫(kù)：截斷肽庫(kù)可用于預(yù)測(cè)確定表位活性的最小長(zhǎng)度氨基酸。

（3）丙氨酸肽掃描文庫(kù)：每個(gè)氨基酸殘基都被丙氨酸單獨(dú)和系統(tǒng)地取代。該庫(kù)可以快速確定每個(gè)氨基酸對(duì)肽功能的貢獻(xiàn)。

（4）隨機(jī)肽庫(kù)：隨機(jī)肽庫(kù)被設(shè)計(jì)為序列優(yōu)化的工具，選定的位置同時(shí)被所有20種天然氨基酸取代，可以增加肽活性。

（5）亂序肽庫(kù)：亂序庫(kù)在所有肽庫(kù)中具有較高的變異性。所得肽通常用作陰性對(duì)照，以表明特定序列對(duì)蛋白質(zhì)功能或活性至關(guān)重要。它也是一種用于尋找新線索的隨機(jī)篩選工具。

（6）位置肽庫(kù)：肽序列中選定的位點(diǎn)或區(qū)域被系統(tǒng)地替換為所有其他天然氨基酸。這允許識(shí)別增強(qiáng)肽活性的氨基酸。

3.多肽文庫(kù)篩選應(yīng)用

多肽文庫(kù)在蛋白質(zhì)組學(xué)及其相關(guān)領(lǐng)域應(yīng)用范圍非常廣泛，如藥物研發(fā)（科研級(jí) Bevacizumab ( cat：YR1001 )）、蛋白-蛋白相互作用、抗原表位篩選、GPCR配體篩選、蛋白功能分析、酶底物或抑制劑篩選、信使分子研發(fā)及多肽/蛋白信號(hào)對(duì)答等。

4.多肽文庫(kù)篩選技術(shù)亮點(diǎn)

（1）可以高通量生產(chǎn)，篩選效率高

（2）可快速制備可溶抗原

（3）可以準(zhǔn)確的定位抗原決定簇，廣泛用于藥物開(kāi)發(fā)

5.卡梅德生物能夠?yàn)榭蛻籼峁└哔|(zhì)量的肽庫(kù)篩選服務(wù)

基于噬菌體平臺(tái)，卡梅德生物擁有多樣性文庫(kù)，如下圖2，可以為客戶構(gòu)建隨機(jī)7肽文庫(kù)，12肽文庫(kù)，15肽文庫(kù)等。卡梅德生物提供的T7噬菌體展示平臺(tái)是一種超高通量的配體篩選方式，通過(guò)該技術(shù)平臺(tái)可以構(gòu)建多達(dá)10¹³/ml個(gè)經(jīng)過(guò)噬菌體展示的多肽或抗體克隆，平均可以做到獨(dú)立克隆數(shù)為10⁹-10¹⁰/ml，經(jīng)過(guò)后續(xù)多輪淘篩可以提供多達(dá)10⁵有效多肽或抗體的序列。

6.卡梅德生物為客戶提供肽庫(kù)篩選服務(wù)的全流程介紹

肽庫(kù)篩選主要分為以下大致流程：目的蛋白質(zhì)量驗(yàn)證，噬菌體滴度檢測(cè)，噬菌體擴(kuò)大培養(yǎng)，噬菌體淘選，測(cè)序，流程圖如下：

6.1目的蛋白質(zhì)量驗(yàn)證

目的蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳，要求蛋白純度>95%，才能進(jìn)行下一步文庫(kù)篩選。

6.2噬菌體滴度檢測(cè)

TG1菌株接種到LB培養(yǎng)基進(jìn)行活化培養(yǎng)，LB培養(yǎng)基添加瓊脂糖后，按照梯度稀釋法培養(yǎng)噬菌體，培養(yǎng)完成的噬菌體涂布至瓊脂平板，進(jìn)行噬菌斑計(jì)數(shù)。

6.3噬菌體擴(kuò)大培養(yǎng)

TG1菌株培養(yǎng)至OD600 0.4 ~0.6后，接種到經(jīng)過(guò)擴(kuò)大培養(yǎng)的宿主菌種，震蕩離心，上清即為噬菌體培養(yǎng)物。

6.4噬菌體淘選

將純化的目的蛋白用96孔酶標(biāo)板進(jìn)行抗原包被過(guò)夜，脫脂內(nèi)粉進(jìn)行封閉，加入擴(kuò)大培養(yǎng)的噬菌體孵育，緩沖液多次洗脫，進(jìn)行噬菌體滴度測(cè)定，濃縮純化后等待下一輪篩選。重復(fù)以上步驟2次，完成后兩輪篩選。

6.5測(cè)序

從第三輪篩選后的細(xì)菌平板上挑取48個(gè)單克隆，經(jīng)過(guò)擴(kuò)增培養(yǎng)后提取質(zhì)粒進(jìn)行測(cè)序。

7.多肽噬菌體展示文庫(kù)篩選實(shí)驗(yàn)結(jié)果