大腸桿菌(Escherichia coli),簡稱E.coli,是一種常見的革蘭氏陰性菌,人和動物的腸道中都存在大量的大腸桿菌。在生命科學研究中,被廣泛應用于基因表達、蛋白質(zhì)表達和酶反應等方面。下面介紹一下它的使用方法。
1.制備大腸桿菌培養(yǎng)基
制備培養(yǎng)基是培養(yǎng)它不可少的步驟。選取適合其生長的培養(yǎng)基,在按比例混合后進行濾器滅菌。常用的培養(yǎng)基有Luria-Bertani(LB)培養(yǎng)基、M9培養(yǎng)基、超優(yōu)培養(yǎng)基等。其中LB培養(yǎng)基最為常用,制備簡單易行,成本較低。
2.取樣并接種
在培養(yǎng)前,需要從凝膠管上提取培養(yǎng)物,并加入到含有培養(yǎng)基的瓶子中進行接種。接種時可以選擇移液管或者注射器等工具,注意操作過程中要消毒清洗。
3.培養(yǎng)條件
其生長條件相對較為寬泛。通常在37度下培養(yǎng),培養(yǎng)時間根據(jù)實驗要求可長達數(shù)天。培養(yǎng)過程中要注意無菌操作、瓶蓋勿開、顛倒培養(yǎng)等。
4.分離純化
大腸桿菌是一種腸道菌群以下(通量) 的微生物,所以在培養(yǎng)過程中很容易出現(xiàn)雜菌。在進行特定實驗時需要凈化大腸桿菌。此時可以通過法拉第籠或者摸板法等方法進行篩選和分離。
5.儲存
保藏溫度通常是-80度冷凍庫,若要長期保存,也可以使用甘油溶液預冷卻后進行長期保存。
總之,大腸桿菌的使用方法包括制備培養(yǎng)基、取樣接種、培養(yǎng)條件、分離純化和儲存。希望本篇文章可以對大家在實際操作中有所幫助。
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