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HPLC使用操作和注意事項(xiàng)

來(lái)源:上海吉眾生物科技有限公司   2011年09月19日 01:06  

 

HPLC使用操作和注意事項(xiàng)
HPLC流程簡(jiǎn)圖:
 
流程
流程:如右圖所示,溶劑貯器(1)中的流動(dòng)相被泵(2)吸入,經(jīng)〔3〕梯度控制器按一寫的梯度進(jìn)行混后然后輸出,經(jīng)(4)測(cè)其壓力和流量,導(dǎo)入(5進(jìn)樣閥(器)經(jīng)(6)保護(hù)柱、(7)分離柱后到(8)檢測(cè)器檢測(cè),由(10)數(shù)據(jù)處理設(shè)備處理數(shù)據(jù)或(11)記錄儀記錄色譜圖,(12)餾分收集器收集餾分,(13)為廢液。.
 
一.       操作步驟
1. 排空狀態(tài):將吸液頭讓在已經(jīng)超聲的甲醇中,旋松排空閥讓機(jī)器以高流速排走機(jī)器或輸液管的氣泡,3—5分鐘后關(guān)閉排空閥,排空結(jié)束。
 
2. 沖洗狀態(tài):以適當(dāng)流速?zèng)_洗機(jī)器核色譜柱大約20分鐘;同時(shí)開啟檢測(cè)器,讓檢測(cè)器處于預(yù)熱和自檢狀態(tài)。
 
3. 聯(lián)機(jī)狀態(tài):打開聯(lián)機(jī)電腦讓色譜工作站和HPLC機(jī)器相連設(shè)定吸收波長(zhǎng),適當(dāng)流速,查看系統(tǒng)壓力是否正常。
 
4. 用已經(jīng)配好的流動(dòng)相換下甲醇開始走基線,此過(guò)程大約20分鐘
 
5. 當(dāng)基線平穩(wěn),開始進(jìn)樣準(zhǔn)備。
 
6. 進(jìn)樣前用進(jìn)樣液清洗六通閥2-3次。
 
7. 樣品打入機(jī)器開始譜圖。
 
8. 譜圖完成清洗機(jī)器和關(guān)閉電腦:用甲醇做流動(dòng)相以適當(dāng)流速開始沖洗機(jī)器大約15分鐘,確定甲醇已經(jīng)充滿機(jī)器管道。同時(shí)用甲醇清洗六通閥若干次。退出色譜工作站和關(guān)閉電腦。
 
9. 整理數(shù)據(jù)填寫結(jié)果。
 
二.          注意事項(xiàng)
1、進(jìn)樣前樣品處理及注意事項(xiàng)
(1)須用平頭液相注射器進(jìn)樣(禁用氣相尖頭進(jìn)樣針);
(2)進(jìn)樣試液應(yīng)無(wú)顆粒、渾濁和乳化,使用前先用超聲波溶解后,須用0.45um 的過(guò)濾膜過(guò)濾;
(3)部分裝取樣時(shí),取樣體積一般小于定管的50%,*裝液相取樣體積取必須是定量環(huán)的5 倍以上
2、操作中注意事項(xiàng):
1). 流動(dòng)相均需色譜純度,水用20M的去離子水。脫氣后的流動(dòng)相要小心振動(dòng)盡量不引起氣泡。
2) 柱子是非常脆弱的,*次做的方法,先不要讓液體過(guò)柱子。
3) 所有過(guò)柱子的液體均需嚴(yán)格的過(guò)濾。
4)  壓力不能太大,不要超過(guò)150kgf/cm2 .
5)  因?yàn)榫彌_試劑遇有機(jī)溶劑,會(huì)結(jié)晶,有損色譜柱,所以,每次由有機(jī)相變流動(dòng)相或流動(dòng)相變有機(jī)相均需用蒸餾水清洗。
6) 溫度是影響HPLC的壓力重要原因之一,所以盡量保持恒溫。

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