血清使用常見問題

1、血清保存的最好方法？

我們建議血清最好保存在-20℃保存。若一次使用不完一瓶，建議無菌分裝于適當?shù)臏缇萜鲀?nèi)冷凍備用。

2、如何解凍血清，才能保證其質(zhì)量不會受損？

我們建議將血清從冷凍箱取出后，置于2℃～8℃冰箱中解凍，然后在室溫下全融，解凍過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。

3、為什么血清在解凍后會出現(xiàn)絮狀沉淀？應該怎樣處理？

血清中絮狀沉淀產(chǎn)生的原因有很多，其中還是由于血清中脂蛋白的變性所致，而血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解凍后，也會存在于血清中，這也是造成沉淀的主要原因，但這些絮狀沉淀并不影響血清本身的質(zhì)量。欲去除沉淀，可采取自然沉降法或者將血清分裝于無菌離心管中，2000～3000rpm離心5min。一般不建議用過濾的方法去除絮狀沉淀，因為沉淀會阻塞濾膜，造成過濾困難或無法過濾。

4、為什么要熱滅活血清？有必要熱滅活嗎？

加熱可以滅活血清中的補體系統(tǒng)，使補體去活化。通常未滅活的補體能夠刺激平滑肌收縮、肥大細胞和血小板組胺的釋放、激活淋巴細胞和巨噬細胞，同時還能夠參與溶解細胞的過程。

諸多研究表明大多數(shù)細胞的培養(yǎng)無須進行血清的熱滅活；而在免疫學研究和ES細胞、昆蟲細胞、平滑肌細胞的培養(yǎng)過程中，推薦使用熱滅活血清。實驗顯示，經(jīng)正確熱滅活處理的血清，對細胞的生長只有微小的促進或沒有促進作用，而通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，造成細胞生長速率降低。并且熱處理過的血清，沉淀物明顯增多，倒置顯微鏡下觀察呈“小黑點”，往往會使研究者誤以為是血清受到了污染，而把血清放于37℃中，沉淀物又會更增多，有會使研究者誤認為是微生物的分裂增殖。因此我們建議若非必須，可以不進行熱處理，既節(jié)省時間又確保質(zhì)量。

5、如何避免沉淀物的產(chǎn)生？

建議您在血清使用的過程中，采用正確的解凍方法（冷凍→4℃→室溫），若血清解凍時改變的溫度太大（如冷凍→37℃）非常容易產(chǎn)生沉淀物。溫度過高、時間過久、搖晃不均勻等，都會造成沉淀增多，我們建議如非必要無須對血清進行滅活；若必須熱滅活，應嚴格遵守56℃，30min的原則，并隨時搖晃均勻。