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細(xì)胞增殖檢測方法選擇指南

來源:愛必信(上海)生物科技有限公司   2023年06月02日 16:21  

近年來,細(xì)胞增殖一直是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。細(xì)胞增殖是指細(xì)胞在周期調(diào)控因子的作用下,通過DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成等復(fù)雜反應(yīng)而進(jìn)行的分裂系列過程,其中核DNA的復(fù)制倍增是整個(gè)過程的重要特征。

細(xì)胞增殖檢測技術(shù)廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、腫瘤生物學(xué)、藥理和藥代動(dòng)力學(xué)等研究領(lǐng)域,不僅在研究細(xì)胞的基本生物學(xué)特征中非常重要,而且是分析細(xì)胞狀態(tài)、研究遺傳性狀的一種基本方法,可為探討疾病的發(fā)病機(jī)制、診斷疾病及治療疾病提供有價(jià)值的資料。

檢測細(xì)胞增殖的方法目前主要分為代謝活性檢測、DNA合成檢測、細(xì)胞增殖相關(guān)抗原檢測等。此外,還可以檢測ATP等酶活性、鈣離子內(nèi)流、細(xì)胞膜完整性等,每種檢測方法都存在各自的優(yōu)缺點(diǎn),應(yīng)根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?,盡量選擇準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好的檢測方法或?qū)⒍喾N檢測方法結(jié)合,從而客觀、全面地反映實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
小愛主要介紹代謝活性檢測和DNA合成檢測兩種常用的細(xì)胞增殖檢測方法。

一、代謝活性檢測

? CCK-8試劑盒  abs50003

產(chǎn)品簡介:Cell Counting Kit 8簡稱CCK-8試劑盒,是用于測定細(xì)胞增殖或毒性實(shí)驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的一種高靈敏度,無放射性的比色檢測法。

檢測原理:CCK-8基于水溶性四唑鹽WST-8。WST-8在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成橙黃色的甲臜(Formazan)染料。甲臜染料能夠溶解在組織培養(yǎng)基中,與活細(xì)胞數(shù)量成正比。通過比色,可以動(dòng)態(tài)地量化活細(xì)胞的數(shù)量,從而對(duì)細(xì)胞增殖或藥物毒性進(jìn)行檢測本試劑盒通常用于貼壁或懸浮細(xì)胞的周期與凋亡檢測。如果用于組織,則需要把組織消化成單細(xì)胞狀態(tài),再進(jìn)行檢測。

產(chǎn)品優(yōu)勢:CCK-8溶液可以直接加入到細(xì)胞樣品中,不需要預(yù)配各種成分,檢測快速,毒性非常低,經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。應(yīng)用非常廣泛,如藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗(yàn)以及生物因子的活性檢測等。

引用文獻(xiàn):愛必信CCK-8試劑盒累計(jì)發(fā)文59篇,其中“Biomimetic Immunosuppressive Exosomes that Inhibit Cytokine Storms Contribute to the Alleviation of Sepsis”,影響因子(IF)高達(dá)30.849。

? CFSE {5(6)-羧基二乙酸熒光素琥珀酰亞胺酯}  abs9106

產(chǎn)品簡介: CFSE是一種可穿透細(xì)胞膜的熒光染料,具有與細(xì)胞特異性結(jié)合的琥珀酰亞胺脂基團(tuán)和具有非酶促水解作用的羥基熒光素二醋酸鹽基團(tuán),使其成為一種良好的細(xì)胞標(biāo)記物。

檢測原理:CFSE本身沒有顏色和熒光,直至細(xì)胞內(nèi)的酯酶去除其醋酸鹽基團(tuán),產(chǎn)生能發(fā)出明亮熒光的羧基熒光素琥珀酰亞胺酯。琥珀酰亞胺酯與細(xì)胞內(nèi)氨基反應(yīng),形成穩(wěn)定且能用醛固定劑固定的熒光偶聯(lián)物,被CFSE 標(biāo)記的細(xì)胞呈綠色熒光。

產(chǎn)品優(yōu)勢:應(yīng)用廣泛,除了流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞增殖外,還可用熒光酶標(biāo)板定量活細(xì)胞數(shù)目,或者用熒光顯微鏡進(jìn)行均一染色的細(xì)胞示蹤觀察。

引用文獻(xiàn):“Multifunctional Mesoporous Silica-Coated Gold Nanorods Mediate Mild Photothermal Heating-Enhanced Gene/Immunotherapy for Colorectal Cancer”,影響因子(IF)6.525

? MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒  abs50010

產(chǎn)品簡介:MTT 法又稱MTT比色法,是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。

檢測原理:活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無此功能。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比,吸光度越大,表示細(xì)胞活性越強(qiáng),說明藥物毒性越小。

產(chǎn)品優(yōu)勢: 靈敏度高、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測定等。

引用文獻(xiàn):“Long noncoding RNA MEG3 suppresses cell proliferation, migration and invasion, induces apoptosis and paclitaxel-resistance via miR-4513/PBLD axis in breast cancer cells”,影響因子(IF)3.699

? Alamar Blue 阿爾瑪藍(lán)細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑  abs47047610

產(chǎn)品簡介: 阿爾瑪藍(lán)(Alamar Blue)是一種細(xì)胞活力檢測試劑,包含一種具細(xì)胞膜滲透性、無毒性且弱藍(lán)色熒光的指示劑刃天青(resazurin)。

檢測原理:刃天青是一種氧化還原指示劑,根據(jù)細(xì)胞代謝還原情況發(fā)生顏色變化。氧化態(tài)的刃天青呈紫藍(lán)色且基本無熒光,其還原態(tài)產(chǎn)物試鹵靈(resorufin)轉(zhuǎn)變?yōu)榉奂t色且高度熒光,產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度與呼吸活細(xì)胞數(shù)量呈正比。阿爾瑪藍(lán)的顏色變化可通過普通分光光度計(jì)檢測吸光度變化,檢測波長為570nm,參考波長為600nm;阿爾瑪藍(lán)的熒光變化可通過熒光光度計(jì)檢測,激發(fā)波長在530~560nm之間,發(fā)射波長為590nm。

產(chǎn)品優(yōu)勢: 阿爾瑪藍(lán)為單一試劑,可連續(xù)快速的檢測細(xì)胞的增殖情況。阿爾瑪藍(lán)對(duì)細(xì)胞無毒無害,不會(huì)干擾電子傳遞鏈,不會(huì)干擾細(xì)胞呼吸或功能,也不會(huì)影響細(xì)胞的抗體合成與分泌等活性。適用于對(duì)同一批細(xì)胞的增殖情況進(jìn)行連續(xù)觀察和更進(jìn)一步的觀察,操作簡便且?guī)缀醪桓蓴_細(xì)胞正常代謝。

二、DNA 合成檢測

? Brdu(5-溴脫氧尿嘧啶核苷)  abs811906

產(chǎn)品簡介:BrdU( bromodeoxy uridine) 是一種胸腺嘧啶核苷類似物,其胸腺嘧啶環(huán)與5位C連接的甲基被溴取代。

檢測原理:BrdU 可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期),活體注射或細(xì)胞培養(yǎng)加入,而后利用抗Brdu單克隆抗體,ICC染色,顯示增殖細(xì)胞。

產(chǎn)品優(yōu)勢:目前常用的細(xì)胞增殖標(biāo)記物有4種,Brdu、DNA polymerase α、PCNA 、Ki-67等。因組織細(xì)胞內(nèi)無內(nèi)源性Brdu存在,特異性強(qiáng),所以Brdu應(yīng)用較廣。

引用文獻(xiàn):“Collagen/heparan sulfate porous scaffolds loaded with neural stem cells improve neurological function in a rat model of traumatic brain injury”,影響因子(IF)3.012。

三、常見問題解答(FAQ

Question

Answer

Q1:用CCK-8試劑盒檢測貼壁細(xì)胞,要預(yù)培養(yǎng)多長時(shí)間呢?

A1:根據(jù)細(xì)胞種類而定,使用需要摸索一下條件。對(duì)于貼壁細(xì)胞,CCK-8的培養(yǎng)時(shí)間一般為1-4小時(shí),但在培養(yǎng)30分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度。

Q2:使用CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞增殖情況需要接種細(xì)胞的數(shù)量是多少?

A2:不同類型細(xì)胞的適用情況不同,實(shí)驗(yàn)時(shí),建議先用幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。

Q3:實(shí)驗(yàn)如何保證每孔的細(xì)胞接種數(shù)量相同呢?

A3:接種時(shí)注意細(xì)胞懸液一定要混勻,以避免細(xì)胞沉淀下來,導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不等,可以每接種幾個(gè)孔就混勻一下。

Q4:如何根據(jù)OD值的大小判斷細(xì)胞的毒性或者增殖情況?

A4:MTT或者CCK-8等通過檢測活細(xì)胞來反映毒性的,OD值與對(duì)照組比,值下降,說明細(xì)胞活力越低,毒性越大或者抑制增殖。

Q5:我的細(xì)胞培養(yǎng)基里含有酚紅,會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果嗎?

A5:含有酚紅的培養(yǎng)基不影響CCK-8試劑盒對(duì)細(xì)胞活性的測定。

Q6:細(xì)胞培養(yǎng)液比較混作,可以用CCK-8試劑盒檢測嗎?會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果嗎?

A6:如果樣品為高渾濁度的細(xì)胞懸液,建議設(shè)定600 nm(或600 nm以上)作為參比波長,扣除參比波長的OD值即可。


細(xì)胞增殖檢測產(chǎn)品推薦

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

 規(guī)格

貨期

abs47047610

Alamar Blue 阿爾瑪藍(lán)細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑

500T/1000T/5000T

1-2周

abs50003

CCK-8試劑盒

500T/5000T

現(xiàn)貨

abs50010

MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒

500T

現(xiàn)貨

abs811906

Brdu

50mg/500mg

現(xiàn)貨

abs9106

CFSE

10mg/50mg

現(xiàn)貨


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Absin特色產(chǎn)品線:

WB相關(guān):ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠;IHC相關(guān):二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;激動(dòng)劑/抑制劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒;呼吸爆發(fā)試劑盒;ELISA試劑盒;重組蛋白;抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對(duì)照抗體;定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...


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