質(zhì)粒的一般實驗步驟

來源：上海一研生物科技有限公司 2023年06月13日 10:01

質(zhì)粒是使用廣泛的基因操作工具，可以進行編碼基因、microRNA、lncRNA的功能研究、啟動子活性、轉(zhuǎn)錄因子及3’UTR調(diào)控研究等。

實驗步驟：

1)質(zhì)粒提取

1.10,0001min離心收集1.5-5ml菌液沉淀于1.5ml離心管中

2.加入100溶液1，振蕩至懸浮

3.加入200溶液2，立即輕柔顛側(cè)離心管6次，使菌體充分裂解，隨后將離心管冰上放置3分鐘

4.加入150山溶液3，立即溫和顛倒離心管數(shù)次，冰上放置3分鐘，10,00g離心10mins

5.將步驟4的上清轉(zhuǎn)移至新的離心管(盡量去除雜質(zhì))，加入等體積的苯酚/氖仿/異成醇混

合均勻10,000離心5min

6.將步驟5的上清轉(zhuǎn)移至新的離心管，加入2倍體積的無水乙醇，室溫放置5-1omin，沉

降DNA

7.10000g離心10分鐘，棄乙醇，保留沉淀，加入1ml706的乙醇洗滌沉淀，10,000離心5分鐘

8.倒掉乙醇溶液，用吸水紙吸凈管壁上的水珠，室溫蒸發(fā)痕量乙醇

9.加入適量含Rnase的TE或滅菌雙蒸水溶解質(zhì)粒DNA

2）質(zhì)粒鑒定瓊脂糖礙膠電泳

灌膠：膠中加入芡光染料< SYBR Green)

加樣：質(zhì)粒+上樣緩沖液→混勻

電泳

結(jié)果觀察：UV燈下

實驗分析：

裂解細胞中除含有質(zhì)粒DNA外，還含有基因組DNA、各種RNA、蛋白質(zhì)和脂類等物質(zhì)，因

用堿裂解法除去雜質(zhì)

1、防止DNA裂解: Solution1

1)、所含糖增加溶洨黏度，維持滲透壓，防止DNA受機械剪切作用降解

2)、所含EDTA抑制酶活性

2、溶解與變性：Solution2

相關(guān)產(chǎn)品

凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負版權(quán)等法律責(zé)任。
如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。

国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影