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大腸桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基的配方及原理

來(lái)源:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司   2023年06月15日 10:41  

本文主要對(duì)大腸桿菌微生物檢測(cè)培養(yǎng)基的配方及原理進(jìn)行了介紹,為化學(xué)實(shí)驗(yàn)從業(yè)人員提供參考!

1、 月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯(LST)
原 理:月桂基硫酸鈉,別名月桂醇硫酸鈉,表面活性作用強(qiáng),具有乳化作用。
一種優(yōu)質(zhì)蛋白胨,是以新鮮牛肉和牛骨經(jīng)胰酶消化,濃縮干燥而成的淺黃色粉末。具有色淺、易溶、透明、無(wú)沉淀等良好的物理性狀。含有豐富的氮源、氨基酸等胰蛋白胨或胰酪胨 20g 提供碳源和氮源滿(mǎn)足細(xì)菌生長(zhǎng)的需求 。

配方:(g/L)


2、 煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯(Brilliant Green Lactose Bile Broth)
原理:膽鹽(Bile Salt):是一種膽酸的鈉鹽,是膽酸的羧基和甘氨酸或?;撬?C2H7NO3S)的氨基(C2H5NO2),通過(guò)酰胺鍵結(jié)合而成。
① 可降低培養(yǎng)基與細(xì)菌細(xì)胞膜界面上的表面張力,使細(xì)胞膜紊亂,導(dǎo)致細(xì)菌自溶。
②腸桿菌科細(xì)菌在腸道內(nèi)長(zhǎng)期與膽汁接觸。對(duì)膽鹽有一定的抵抗力。合適的膽鹽量能促進(jìn)該科細(xì)菌的生長(zhǎng)。
③膽鹽遇酸生成沉淀,使菌落色素不致擴(kuò)散從而有利于鑒別。
④ 膽鹽中含有一定量的膽紅素、粘蛋白、色氨酸,對(duì)不受膽鹽抑制的細(xì)菌生長(zhǎng)有營(yíng)養(yǎng)作用。
煌綠(亮綠):抑制革蘭氏陽(yáng)性菌和大多數(shù)非沙門(mén)氏菌的革蘭氏陰性桿菌,通常抑制發(fā)酵乳糖、蔗糖的細(xì)菌?;途G和枸櫞酸鈉對(duì)大腸菌的生長(zhǎng)、菌體蛋白質(zhì)的合成和糖的利用都有顯著的抑制作用,以煌綠的作用為較強(qiáng)。枸酸鈉能抑制大腸菌的呼吸,而煌綠的抑制作用則較弱?;旌夏扄}及硫代硫酸鈉對(duì)大腸菌的上述代謝活動(dòng)都沒(méi)有抑制作用。

配方:(g/L)

用法:將蛋白胨、乳糖溶于約500 ml蒸餾水中,加入牛膽粉溶液200 ml(將20.0 g 脫水牛膽粉溶于200 ml 蒸餾水中,調(diào)節(jié)pH至7.0~7.5),用蒸餾水稀釋到975 ml,調(diào)節(jié)pH,再加入0.1%煌綠水溶液13.3 ml, 用蒸餾水補(bǔ)足到1000 ml,用棉花過(guò)濾后,分裝到有玻璃小倒管的試管中,每管10ml 。121 ℃高壓滅 15 min 。

3、 伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)Eosin-Methylene Blue Agar

原理:
伊紅美藍(lán)瓊脂含有伊紅和美藍(lán)兩種苯胺類(lèi)染料,它們可以抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)。伊紅為酸性染料,美藍(lán)為堿性染料。當(dāng)大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時(shí)細(xì)菌帶正電荷被染成紅色,再與美藍(lán)結(jié)合形成紫黑色菌落,并帶有綠色金屬光澤。而產(chǎn)氣桿菌則形成呈棕色的大菌落。
在堿性環(huán)境中不分解乳糖產(chǎn)酸的細(xì)菌不著色,伊紅和美藍(lán)不能結(jié)合,故沙門(mén)氏菌等為無(wú)色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)。
常用的伊紅美藍(lán)乳糖培養(yǎng)基,可用來(lái)鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細(xì)菌。如果有大腸桿菌,因其強(qiáng)烈分解乳糖而產(chǎn)生大量的混合酸,菌體帶H+,故菌落被染成深紫色,從菌落表面的反射光中還可以看到金屬光澤。

配方:(g/L)


用法:稱(chēng)取本品 37.4g,加熱攪拌溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝三角瓶,121℃高壓滅菌 15分鐘, 備用。

4、 EC肉湯 (E.Coli Broth)
用途:用于糞大腸菌群、大腸桿菌的測(cè)定(GB2008、SN標(biāo)準(zhǔn))
配方:(g/L)


5、 營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面 營(yíng)養(yǎng)瓊脂(NA)Nutrient Agar
用途:細(xì)菌計(jì)數(shù)、不含糖,可作血瓊脂基礎(chǔ)和傳代用(GB標(biāo)準(zhǔn))。
配方:(g/L)

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