1.固相抗體和酶標(biāo)檢測抗體一定是分別針對待測抗原的兩個(gè)不同抗原決定簇，不然兩個(gè)抗體就會(huì)為爭同一個(gè)決定簇而打架，會(huì)出現(xiàn)假陰性的不良結(jié)果；2.如果檢測的樣本是血清，就要注意風(fēng)濕病患者體內(nèi)內(nèi)風(fēng)濕因子RF這種奇葩異種抗體的存在，它能夠神奇地結(jié)合固相抗體和檢測抗體，造成假陽性的不良結(jié)果；3.包被的固相抗體含量一定是高于樣品中的抗原含量，不然檢測到的含量會(huì)比實(shí)際含量低；4.如果有童鞋想省事一些，將待測樣品與酶標(biāo)檢測抗體同時(shí)加入固相載體，在酶標(biāo)檢測抗體高于樣品中的待測抗原的情況下，會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果，這種現(xiàn)象書本叫鉤狀效應(yīng)。 2、競爭法 針對小分子抗原。這種方法也可以用于大分子抗原，只是相對雙抗夾心法這種強(qiáng)悍的策略，競爭法沒有優(yōu)勢，所以競爭法只在檢測小分子這個(gè)邊緣地帶發(fā)揮余熱了。臨床上主要用于T3、T4、孕酮等激素以及藥物等。檢測步驟與雙抗夾心法更簡單，包被、洗滌、加樣、洗滌、顯色，少了一步加樣的過程，但是設(shè)計(jì)上復(fù)雜一些，首先將純化的相應(yīng)抗體包被在固相載體上，然后每組樣本需要分兩組，一組同時(shí)加入事先混勻好的酶標(biāo)檢測抗原和樣本的混合物，一組只加入酶標(biāo)記抗原，兩組顏色只差便是待測抗原的含量，有點(diǎn)暈啊。

       對于競爭法也需要注意一點(diǎn)，酶標(biāo)記抗原和待測樣本一定要事先混勻好，然后同時(shí)加入固相載體，不然會(huì)造成平競爭，檢測出現(xiàn)偏差；抗體的檢測設(shè)計(jì) 就方法來說，有間接法、雙抗原夾心法、競爭法和捕獲法四種設(shè)計(jì)。

 1、 間接法，這個(gè)是檢測抗體的方法。操作步驟與雙抗夾心一樣，只是包被是純化的相應(yīng)抗原而不是抗體了，加入樣品后洗滌，再加入的酶標(biāo)記抗抗體，然后顯色，顏色深淺與樣品中待測抗體的濃度正相關(guān)。這個(gè)間接法的原理和步驟與雙抗夾心一樣一樣的，為了區(qū)分就把包被抗原檢測抗體叫做間接法了，以此類推，之前的雙抗夾心法也可以叫做直接法，命名其實(shí)就是這么回事，規(guī)則多了就容易讓人糊涂。間接法也有一些自己的特點(diǎn)，1.酶標(biāo)記抗抗體可選擇性檢測抗體的亞型，可用于鑒別感染時(shí)期，如果是IgM那么提示感染早期；

2.酶標(biāo)抗抗體檢測抗體特異性不高，容易產(chǎn)生假陽性，如果封閉不，可出現(xiàn)全板陽性，挺嚇人的。臨床上常用該方法檢測抗HCV抗體、抗HEV抗體、抗CMV抗體、抗HSV抗體、抗沙眼衣原體抗體等等。