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polyplus轉(zhuǎn)染試劑 jetPRIME®產(chǎn)品說明書

來源:天津益元利康生物科技有限公司   2023年06月28日 11:16  

polyplus轉(zhuǎn)染試劑 jetPRIME®產(chǎn)品說明書

polyplus轉(zhuǎn)染試劑 jetPRIME®產(chǎn)品說明書以DNA轉(zhuǎn)染為例來進(jìn)行說明:

第0天:細(xì)胞接種

→根據(jù)下表在V mL細(xì)胞生長培養(yǎng)基中接種細(xì)胞(每個孔、盤子或燒瓶的數(shù)量)

培養(yǎng)皿

細(xì)胞數(shù)量

V=轉(zhuǎn)染過程中培養(yǎng)基的體積

96孔板

7500 - 10 000

0.1 mL

24孔板

50 000 - 80 000

0.5 mL

12孔板

80 000 - 150 000

1 mL

6孔板/35mm

150 000 - 250 000

2 mL

100 mm/燒瓶 75 cm2

1 x 106 - 2 x 106

10 mL

*備注:對于特定的細(xì)胞類型或懸浮細(xì)胞,請參考完整的方案。

第1天:轉(zhuǎn)染

→在血清存在的情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)染

→僅使用jetPRIME®緩沖液

→以60-80%融合率轉(zhuǎn)染細(xì)胞

30-1.png

培養(yǎng)皿

W=jetPRIME®緩沖液的體積

X=添加的DNA

Y=jetPRIME®試劑的體積

96孔板

10 µL

0.1 µg

0.2 µL

24孔板

     50 µL

0.5 µg

1 µL

12孔板

75 µL

0.8 µg

1.6 µL

6孔板/35mm

200 µL

2 µg

4 µL

100 mm/燒瓶 75 cm2

500 µL

10 µg

20 µL

第2-3天:測量基因表達(dá)

Protocol優(yōu)化:

測試不同的DNA量:X、0.5X和1.5X;

測試不同的DNA/jetPRIME®比例,1:2至1:3;

有關(guān)細(xì)胞特異性Protocol,請聯(lián)系益元利康客服獲取相關(guān)信息。

培養(yǎng)皿

W=jetPRIME®緩沖液的體積

X=添加的DNA

Y=jetPRIME®試劑的體積

96孔板

10 µL

0.05-0.20 µg

0.10-0.60 µL

24孔板

50 µL

0.25-0.75 µg

0.50-2.25 µL

12孔板

75 µL

0.4-1.2 µg

0.8-3.6 µL

6孔板/35mm

200 µL

1-3 µg

2-9 µL

100 mm/燒瓶 75 cm2

500 µL

5-15 µg

10-45 µL


備注:對于HEK-293和HeLa細(xì)胞,可以將DNA量減少到0.5X,并使用1:2 DNA/jetPRIME®比例。

提高敏感細(xì)胞細(xì)胞活力的提示:

轉(zhuǎn)染后4小時更換培養(yǎng)基;

將DNA量減少到0.5倍,同時保持之前使用的DNA/jetPRIME®比例;

在較早的時間點(例如轉(zhuǎn)染后24小時而不是48小時)分析轉(zhuǎn)染;

檢查靶基因是否影響細(xì)胞活力。

良好的DNA轉(zhuǎn)染實例:

適當(dāng)儲存jetPRIME®(5±3°C);

確保細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前已傳代兩次以上且少于20次;

丟棄過度分化的細(xì)胞;

定期檢查支原體污染情況;

使用報告基因來建立和優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件;

血清質(zhì)量可能嚴(yán)重影響轉(zhuǎn)染效率,購買新一批血清時或胰蛋白酶檢查細(xì)胞活力以及轉(zhuǎn)染效率。

更多有關(guān)polyplus轉(zhuǎn)染試劑 jetPRIME®產(chǎn)品說明書的介紹,請聯(lián)系益元利康客服!

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