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盤點(diǎn)那些年我們用過的檢測器(二) ——細(xì)說示差檢測器

來源:月旭科技(上海)股份有限公司   2023年06月29日 10:09  

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液相色譜檢測器種類較多,如何選擇合適的檢測器?以及為什么這樣選擇?之前的推文中我們陸續(xù)盤點(diǎn)了UV、DAD、ELSD等檢測器,今天再跟大家聊一聊示差檢測器。


盤點(diǎn)那些年我們用過的液相檢測器(一)


一、RI 示差折光檢測器原理簡介

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RID是一種偏轉(zhuǎn)式或者斯涅爾式折射率檢測器。斯涅爾定律指出,平行光束沿著一個大于零的入射角通過一個將兩種具有不同折射率的介質(zhì)分開的電介質(zhì)界面時,其折射率將與兩種介質(zhì)的折射率差幅成函數(shù)關(guān)系。


二、示差檢測器結(jié)構(gòu)

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示差折光檢測器結(jié)構(gòu)示意圖

1、鎢燈 2、聚光透鏡 3、狹縫 4、準(zhǔn)直鏡 

5、狹縫 6、檢測池 7、反光鏡 8、零位玻璃 

9、光敏接收元件

低功率、長壽命的鎢燈發(fā)射出的光線經(jīng)過準(zhǔn)直透鏡和狹縫后,通過參比池(參照池)和樣品池(樣本池),經(jīng)平面鏡反射回來后,再次通過光學(xué)單元,最后通過透鏡聚焦到一對光傳感二極管上(光傳感器)。在測試期間,參比池和樣品池中充滿流動相。參比池隨后與流路隔開,流動相僅流過樣品池。如果兩個池中介質(zhì)的折射率沒有差異,光線在通過它們時將不會發(fā)生折射。

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1 光束

2 樣本池

3 參照池

4 光軸(Ns>Nr)

5 光軸(Ns=Nr)

6(4)和(5)在光傳感器處的間距

7 光傳感器

Ns:樣本池中流動相的折射率

Nr:參照池中流動相的折射率

光線照射到一對光電二極管上,其中每個光電二極管都將給出一個電信號。隨后這些信號會被放大,從而測得兩個信號之間的差異。如果是零折射,這些信號之間的差異應(yīng)該為零伏。借助一個電控機(jī)械聯(lián)動裝置,用戶可以通過光路中的折射透鏡來優(yōu)化光電二極管的零偏轉(zhuǎn)輸出。還可以通過額外電路輕松地將信號輸出校正為電子零點(diǎn)。

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1 光傳感器A

2 光傳感器B

3 光束

當(dāng)流動相的折射率發(fā)生變化時,通過樣品池和參比池之間界面的光將被折射,從而使一個光電二極管上的光強(qiáng)增大,另一個電二極管上的光強(qiáng)減小。這種差異產(chǎn)生具有振幅和極性的信號,此信號被放大后,可以驅(qū)動圖表記錄儀。


三、應(yīng)用舉例

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示差折光檢測器是一種通用型檢測器,只要被測組分與洗脫液的折光指數(shù)有差別就可使用。生命科學(xué)中常遇到各類糖類化合物,沒有紫外吸收,一般常用示差折光檢測器,她的通用性比UVD廣,但靈敏度要低,對溫度變化敏感,并與梯度洗脫不相容,因而限制了它的使用。

應(yīng)用一:麥芽糖、果糖、葡萄糖、異麥芽糖、麥芽三糖

色譜條件

色譜柱:月旭Xtimate® NH2(4.6×300,5μm)。

流動相:乙腈:水=75:25;

檢測器:RID;

柱溫:30℃;

流速:1.0mL/min;

進(jìn)樣量:50μL。

色譜圖

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應(yīng)用二:磷酸果糖二鈉、蔗糖、葡萄糖、果糖

色譜條件

色譜柱:月旭Xtimate® sugar-Ca(7.8×300mm,8μm)。

流動相:純水;

檢測器:RID;

溫度:柱溫75℃,檢測器40℃;

流速:0.2mL/min;

進(jìn)樣量:10μL。

色譜圖

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四、示差檢測器維護(hù)

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要想獲得良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,使用RID的三大法寶:

第一、脫氣;

第二、平衡好流動相;

第三、保持恒溫恒壓。

在實(shí)際工作中我們會遇到很多典型的問題,接下來我們一起來分析一下這些問題如何破。

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五、使用注意事項(xiàng)

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1、正確放置溶劑瓶和廢液瓶。

要把溶劑瓶放在比示差監(jiān)測器和溶劑泵還要高的位置,檢測器出口留足夠長的廢液管通到下方的廢液瓶,這樣可以使樣品池有一定背壓,有利于檢測信號的穩(wěn)定。

2、循環(huán)使用流動相。

建議循環(huán)使用流動相。在沒有進(jìn)行分析時,打開循環(huán)閥,讓流動相進(jìn)行循環(huán),這樣泵就可以連續(xù)運(yùn)行不必停止,一直到進(jìn)行下一個分析。這樣操作不僅可以節(jié)省流動相,而且檢測器可以連續(xù)穩(wěn)定的運(yùn)行,隨時進(jìn)行樣品分析。

3、示差折光檢測器不能用做梯度洗脫。

由于介質(zhì)的改變和壓力的波動都會影響基線的穩(wěn)定性,所以使用示差折光檢測器時不能進(jìn)行梯度洗脫。

4、保證檢測器的溫度恒定。

光學(xué)系統(tǒng)和流動相的溫度對基線的穩(wěn)定性影響很大。示差折光檢測器可在比室溫高5℃到55℃的范圍內(nèi)控溫。建議將溫度設(shè)為比室溫高5℃,并確保柱溫箱的溫度與檢測器保持一致。溫度不宜過高,因?yàn)榻橘|(zhì)的折光指數(shù)隨溫度升高而降低,溫度過高會使靈敏度降低。

5、不可讓流通池承受過大的壓力。

示差折光檢測器流通池的反壓約為1000psi,如果還要在系統(tǒng)里連接其他檢測器。即示差折光檢測器在流路系統(tǒng)里必須放在最后,以防壓力增大時損壞流通池。

6、某些溶劑隨長時間存放而改變會造成基線的漂移。

例如乙腈/水的混合物中乙腈的含量會降低,四氫呋喃會變成過氧化物,在吸濕性有機(jī)溶劑中的水量會增加,而保存在參比流通池中的溶劑如四氫呋喃會產(chǎn)生氣體。因此,流動相最好做到臨用現(xiàn)配或在有效期內(nèi)使用。對于含有有機(jī)溶劑的流動相一般有效期3天,對于不含有機(jī)溶劑的流動相如純鹽或者純水則根據(jù)室溫情況,可臨用現(xiàn)配或是配置好4℃冷藏,取用前先放置至室溫。

7、避免流動相和特定的色譜柱反應(yīng)。

某些流動相和特定的色譜柱反應(yīng),會產(chǎn)生長時間的噪聲,例如乙腈/水流動相和氨丙基鍵合固定相在一起會出現(xiàn)這一現(xiàn)象。要判斷長時間的噪聲是否是由流動相/色譜柱的反應(yīng)而產(chǎn)生,應(yīng)該使用限流毛細(xì)管代替色譜柱,考查示差折光檢測器的性能。

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