避免 RNA 降解的方法以及RNA 中含有逆轉(zhuǎn)錄抑制劑時(shí)的處理
避免 RNA 降解的方法:
1.在用來驗(yàn)證完整性之前先在變性膠上分析 RNA。
2.使用良好無污染技術(shù)分離 RNA。
3.將組織從動(dòng)物體取出后立刻提取 RNA,并將提取好的 RNA 反轉(zhuǎn)錄為 cDNA 進(jìn)行低溫保存。
RNA 中含有逆轉(zhuǎn)錄抑制劑時(shí)的處理:
逆轉(zhuǎn)錄抑制劑包括:SDS、EDTA、甘油、焦磷酸鈉、亞精胺和胍鹽,可將對(duì)照 RNA 同樣品混合,同對(duì)照 RNA 反應(yīng)比較產(chǎn)量以檢測 RNA 抑制劑;若對(duì)照 RNA 與樣品混合后產(chǎn)量降低,則說明樣品中存在逆轉(zhuǎn)錄抑制劑,可用 70%(v/v)乙醇對(duì) RNA 沉淀進(jìn)行清洗,以除去抑制劑。
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