ACE2是介導(dǎo)新冠病毒侵入的受體。然而，新冠病毒也被發(fā)現(xiàn)可以侵染ACE2陰性細(xì)胞，這意味著“狡猾”的新冠病毒還可能存在其他受體。

 

 

圖1. TMEM106B/S蛋白復(fù)合物結(jié)構(gòu)解析發(fā)現(xiàn)TMEM106B結(jié)合S蛋白的RBD結(jié)構(gòu)域，其中S蛋白上的484位Asp以及TMEM106B的LD（管腔結(jié)構(gòu)閾）的Met210/Phe213是結(jié)合界面上的重要氨基酸殘基

那么兩者的親和力如何呢？上Octet® 非標(biāo)記分子互作系統(tǒng)!

結(jié)果顯示，TMEM106B與S蛋白有著明顯的結(jié)合，但是TMEM106B突變M210和F210位點后，就沒有結(jié)合了，數(shù)據(jù)證實了復(fù)合物結(jié)構(gòu)解析的結(jié)論。

最近出現(xiàn)的比利時毒株的S蛋白484位為天冬氨酸（D484），而最初毒株為谷氨酸（E484）。用Octet® 檢測發(fā)現(xiàn)，D484的S蛋白親和力比E484強(qiáng)，也解釋了D484的侵染性更強(qiáng)的原因。

TMEM106B結(jié)合S蛋白的RBD結(jié)構(gòu)域也是ACE2的結(jié)合區(qū)域，那么ACE2會不會與TMEM106B競爭結(jié)合S蛋白呢？

Octet® 的一系列實驗結(jié)果在分子水平上驗證了復(fù)合物結(jié)構(gòu)解析的結(jié)果。但是，如何在細(xì)胞學(xué)水平上證實TMEM106B與S蛋白的結(jié)合呢？是時候發(fā)揮Incucyte® 實時活細(xì)胞分析系統(tǒng)的威力了！

文章進(jìn)行了細(xì)胞-細(xì)胞融合試驗：通過ACE2或TMEM106B、S蛋白（帶綠色熒光）轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，使其在表面表達(dá)這些蛋白；如果TMEM106B與S蛋白發(fā)生結(jié)合，細(xì)胞可以融合形成更大的細(xì)胞團(tuán)。

總結(jié)

距離新冠病毒被發(fā)現(xiàn)已經(jīng)有三年多的時間了，雖然許多人早已經(jīng)歷過兩次“陽”性，但我們依然不能高枕無憂，新冠病毒仍有可能卷土重來。因此，對它的侵染機(jī)理進(jìn)行研究仍然是至關(guān)重要的，只有進(jìn)行更多的基礎(chǔ)研究，才能為藥物研發(fā)指明方向。該文作者以TMEM106B為靶點篩選到一些抗體，并發(fā)現(xiàn)這些抗體能阻止新冠病毒對細(xì)胞的侵染。雖然也有其他文章發(fā)現(xiàn)了除ACE2外的其它新冠病毒受體，但該文不僅結(jié)合多種手段對復(fù)合物結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析，而且用Octet®、Incucyte® 等手段進(jìn)行了驗證，因此，可信度很高，這也是本文能夠被CELL收錄的原因之一。

• 培養(yǎng)箱內(nèi)可長達(dá)數(shù)周的連續(xù)觀察，最短幾分鐘間隔拍攝，減少人力，防止過多操作對細(xì)胞的傷害；這篇文章每隔3個小時拍攝，連續(xù)拍攝3天

• 6個板位，分別獨立設(shè)置檢測程序，可以兼容各種孔板和培養(yǎng)皿，通量高

• 高效簡便的模塊化軟件設(shè)置和數(shù)據(jù)分析，輸出圖片、視頻、生長曲線等多指標(biāo)多參數(shù)；本文提到了使用Incucyte® 通過設(shè)置熒光目標(biāo)面積大小對一些未融合的細(xì)胞進(jìn)行過濾，使得結(jié)果更加準(zhǔn)確

• 大于100種優(yōu)化過的活細(xì)胞專用熒光試劑、耗材及詳盡的Protocol，文章數(shù)大于14000篇，是長時間活細(xì)胞成像產(chǎn)品中的佼佼者

• 非標(biāo)記Direct Binding是趨勢，它的結(jié)果更準(zhǔn)確

• 快速測定親和力，更加定量化對互作進(jìn)行表征

• 無洗滌步驟，可測弱親和力（解離快）；本文的結(jié)合就是典型的快解離

• 測試時間短，一般10-20分鐘，更快拿到結(jié)果

• 實驗形式多樣化：定性，兩者結(jié)合，協(xié)同/競爭實驗，垂釣

• 寫入美國藥典，文章>13,000篇，認(rèn)可度廣

• 萬金油技術(shù)，可以用與檢測DNA、小分子、蛋白等各種生物分子

• 使用方便，成本相對低

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參考文獻(xiàn)

[1] TMEM106B is a receptor mediating ACE2- independent SARS-CoV-2 cell entry.Cell,2023