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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)常見問題及解決方法

來源:上海欣維宇生物科技有限公司   2023年07月26日 11:26  
  對(duì)于ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)新手來說,實(shí)驗(yàn)中遇到的一些棘手的問題便無從下手,為大家列出了ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中一些常見的問題以及解決方法,希望對(duì)您有所幫助:
  問題序號(hào)可能原因解決方法顯色淡,靈敏度偏低。
 ?。?)試劑盒未充分平衡試劑盒從2~8℃冰箱取出后打開盒蓋,于室溫平衡至少20分鐘,確保所有試劑已平衡至室溫(約25℃)
 ?。?)樣品不適合做ELISA檢測(cè)樣品一般選擇培養(yǎng)上清、血清、血漿。其他樣品形式可能不適合做ELISA檢測(cè)或者需要優(yōu)化檢測(cè)的條件(例如稀釋液的成分)
 ?。?)酶標(biāo)板在貯存或洗后拍干時(shí)過分干燥防止板過于干燥
 ?。?)包被抗體遭到破壞操作溫和,移液槍不能碰到孔底
 ?。?)樣本和抗體孵育條件不合適按照說明書條件,建議孵育過程中全程振蕩孵育。
  (6)洗滌浸泡時(shí)間過長(zhǎng)按照說明書操作。勿人為增加浸泡時(shí)間;
  (7)偶聯(lián)HRP試劑污染棄去試劑,重新配置
  (8)錯(cuò)誤的稀釋偶聯(lián)HRP試劑棄去試劑,重新配置
  (9)TMB底物孵育時(shí)間過短,因非人為因素影響,需要優(yōu)化孵育時(shí)間確定合適的孵育時(shí)間:人為判定-最高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn)深藍(lán)色;S4-5有淡藍(lán)色;機(jī)器判定620 nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值達(dá)到0.6-0.65
 ?。?0)樣本濃度過高或存在基質(zhì)效應(yīng)建議做不同稀釋倍數(shù),確認(rèn)樣本最合適的稀釋倍數(shù)。
  (11)酶標(biāo)儀濾光片設(shè)置有問題或者波長(zhǎng)選擇不對(duì)確認(rèn)儀器設(shè)置及選擇正確的波長(zhǎng)檢測(cè)。
 ?。?2)酶標(biāo)板不適合做ELISA不能使用細(xì)胞培養(yǎng)板,建議使用ELISA專用高吸附力板子。背景深,全部呈有色(通常的Elisa背景值OD<0.2)

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