可能存在的原因有：

1. 試劑盒儲(chǔ)存不當(dāng)或儲(chǔ)存環(huán)境差。您應(yīng)按照數(shù)據(jù)表上的建議儲(chǔ)存所有組分，而不是在室溫下過長時(shí)間。

2. 標(biāo)準(zhǔn)的制備不正確。您應(yīng)根據(jù)試劑盒的方案，使用推薦的稀釋劑嚴(yán)格重構(gòu)標(biāo)準(zhǔn)。在使用前的10分鐘內(nèi)準(zhǔn)備好試劑，并迅速加入孔中。

3. 添加樣本后混勻不充分。當(dāng)同時(shí)添加多個(gè)試劑時(shí)，您應(yīng)在渦旋混合器中充分混合試劑。在持有試劑時(shí)要小心，避免濺出。

4. 孔讀數(shù)重復(fù)性差。您應(yīng)校準(zhǔn)酶標(biāo)儀。

5. 孵育時(shí)間、洗滌條件、顯色條件和操作者不一致。您應(yīng)重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)。確保反應(yīng)條件和操作者一致。

6. 洗滌不當(dāng)。您應(yīng)使用移液管加入200μL的洗滌緩沖液，或者用移液管充分填滿每個(gè)孔，但不允許溢出。檢查酶標(biāo)板洗滌器的所有孔口，確保充分的洗滌。

7. 溫度不均勻。您應(yīng)在孵育期間保持恒定溫度，避免溫度波動(dòng)。

8. 加樣本時(shí)壁面殘留過多或移液管尖劃傷孔底。您應(yīng)緩慢、小心地將移液管尖沿孔壁降低，避免觸碰孔底。

9. 重復(fù)使用材料。您應(yīng)在樣本之間更換移液管尖，在試劑之間更換儲(chǔ)液器。

10. 偶爾在截?cái)嘀蹈浇霈F(xiàn)的陽性和陰性值。您應(yīng)對(duì)同一樣本設(shè)置3個(gè)重復(fù)測(cè)量，并在2個(gè)樣本中獲得相同的結(jié)果。

11. 加樣本時(shí)的交叉污染。您應(yīng)在添加樣本時(shí)避免交叉污染。