FlyLink™ 染料是一系列高度水溶性的熒光染料，跨越可見光和近紅外光譜，用于標(biāo)記生物分子，特別是蛋白質(zhì)和核酸。FlyLink™ 染料具有不同熒光染料的核心結(jié)構(gòu)，覆蓋了從UV到NIR的熒光光譜。對核心結(jié)構(gòu)的創(chuàng)新修改使FlyLink™ 染料優(yōu)于其他商業(yè)染料，具有許多創(chuàng)新的新特性。我們的試劑盒已經(jīng)預(yù)先激活，可以直接用于偶聯(lián)。FlyLink™ 標(biāo)簽套件是為準(zhǔn)備FlyLink而設(shè)計(jì)的™直接來自蛋白質(zhì)、肽和其他含有游離氨基的配體的綴合物

艾美捷AF 555偶聯(lián)試劑盒：

Cat #: D-AKE520/D-AKE530/D-AKE540/D-AKE560/D-AKE580

Size: 100 μg*3

Storage: Stored at -20°C for 6 months, protected from light

AF 555偶聯(lián)試劑盒信息：

圖1：FlyLink™ 555是一種明亮且可光穩(wěn)定的熒光染料，可由555 nmargonlaserline最佳激發(fā)，它是TRITC、Cy3和Alexa Fluor 555的超級替代品。它產(chǎn)生生物學(xué)上更特異的偶聯(lián)物和無背景

圖2：FlyLink™ 555光譜圖

數(shù)據(jù)分析

1.共軛物濃度的計(jì)算：

C（mg/mL）=｛[A2so-（AmaxxCf）]÷1.4｝x稀釋因子

式中：C，實(shí)驗(yàn)中收集的偶聯(lián)物的濃度；稀釋因子：光度測量中的稀釋因子；

Azso和Ama：280 nm處的吸光度和最大吸收波長處的吸光度（最大

FlyLink“”AF 488的吸收波長為490 nm）；Cf：修正系數(shù)。FlyLink“”AF 488的Cf值為0.1；

1.4：gG的消光系數(shù)（mL/mg）。FlyLink“”AF 488的消光系數(shù)為70000。

2.共軛物標(biāo)記度（DOL）的計(jì)算：

DOL=（AmaxMwtx稀釋系數(shù)）÷（exC）

式中：Ama：在最大吸收波長（FlyLink“AF 488的最大吸收波長為490 nm）下的吸光度；Dilution factor：光度測量中的稀釋因子；C：實(shí)驗(yàn)中收集的偶聯(lián)物的濃度；Mwt：待標(biāo)記樣品的分子量；?：熒光染料的消光系數(shù)，FlyLink的消光系數(shù)”“488 AF是70000。

注：柱洗脫的綴合物可能過于濃縮，無法直接進(jìn)行吸光度檢測，因此需要稀釋至合適的濃度（在蛋白質(zhì)分析儀檢測的濃度范圍內(nèi)）。稀釋倍數(shù)（即稀釋因子）需要根據(jù)初始樣品質(zhì)量和洗脫綴合物的總體積進(jìn)行估計(jì)。如果未稀釋，則稀釋系數(shù)為1。

FAQ：

Q1：濃縮后，樣品濃度仍低于2 mg/mL？

A1：如果濃縮后樣品濃度仍低于2 mg/mL，則可以適當(dāng)調(diào)整標(biāo)記系統(tǒng)的體積，但最終濃度應(yīng)大于1 mg/mL。FlyLink的音量™步驟1中的AF488標(biāo)記溶液應(yīng)為標(biāo)記系統(tǒng)體積的10%。在步驟2中，去離子水可能不會結(jié)塊，并且激活的FlyLink的體積™ 488解決方案保持不變。你也可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)做出適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。

Q2：如何選擇合適的純化柱，以適應(yīng)不同分子量的待標(biāo)記樣品

A2：純化的柱適用于分子量為100KD至200KD的樣品。如果樣品的分子量大于200kD或小于100kD，則最好配備更合適的純化柱尺寸。

Q3：待標(biāo)記樣品的分子量是否與FlyLink相似™ AF 488？

A3：如果樣品的分子量與FlyLink相似™ AF 488，在完成與本說明書對應(yīng)的標(biāo)記步驟后，加入30µL 0.5µM NH4Cl，并在37°C下孵育10分鐘，以猝滅freeFlyLink™AF 488，而不需要純化步驟。