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F-E3雌三醇（游離的）ELISA試劑盒
美國DRG*，貨號：EIA-1612
美國DRG中國*代理商“深圳科潤達生物工程有限公司”竭誠為您服務(wù)
1、應(yīng)用范圍
DRG公司的雌三醇酶免試劑盒可用于孕婦中孕期血清游離雌三醇的體外檢測。
2、實驗說明
雌三醇（E3）是由孕期胎盤生成的主要雌激素，游離E3通過胎盤進入母親的血循環(huán)，在那里很快降解為葡糖苷酸和硫酸鹽衍生物以便于排泄。雌三醇在母親血液中的半衰期只有20-30分鐘，因此可以方便快捷的評價zui近的胎兒狀態(tài)。血漿雌三醇水平穩(wěn)定地升高且在孕晚期（28-40周）升高得zui快。胎盤雌三醇的產(chǎn)生突然減少將導(dǎo)致母親血清的游離雌三醇快速降低，測定游離雌三醇比測定血清總E3或尿中E3有許多可能的優(yōu)勢，游離雌三醇水平與母親的肝腎功能無關(guān)，也不受某些抗體的影響，因此游離雌三醇更準確地反映糖尿病孕婦胎兒的結(jié)果。因為游離雌三醇不會發(fā)生任何水解，所以我們可以更快得到實驗結(jié)果。DRG公司的E3酶免試劑盒是以一種非同位素的方法檢測人血清中的游離E3。這種方法利用了一種高特異性的E3抗體和酶聯(lián)分析物。zui后用酶標儀檢測顯色產(chǎn)物。此試劑盒有效期長，無放射性同位素的影響，而且有注冊證明，因此它廣泛適用于各大小實驗室。
3、實驗原理
DRG公司的雌三醇（游離的）酶免試劑盒是一種基于競爭法原理的固相酶免吸附實驗（ELISA）。在此實驗中，雌三醇用辣根過氧酶標記。將含雌三醇的血清與辣根過氧酶標記的雌三醇混合并加入到包被板的微孔中。雌三醇的抗體已預(yù)先包被在包被板的微孔上。溫育一個小時后，用洗滌液洗去未結(jié)合的辣根過氧酶標記的雌三醇和樣品雌三醇。再向微孔中加入底物液，溫育之后再加入能產(chǎn)生有色產(chǎn)物的終止液，之后在酶標儀上讀取OD值。
3、試劑盒成份
注：儲存于2-8℃的環(huán)境下。
1） 兔抗雌三醇抗體包被的包被板，12 ×8孔，微孔中包被了雌三醇抗體。
2） 雌三醇血清標準，共6支（標準品0-5）， 1ml/支，（0；0.3；1.2； 4；15；40ng/ml），每支都裝有含雌三醇的人血清、鹽緩沖液和防腐劑。注意：將其當作乙肝病毒和HIV病毒的潛在傳染原進行處理。標準品的原材料用*試劑進行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與乙肝病毒表面抗原和HIV間不反應(yīng)。然而，目前沒有任何方法能保證來源于人的產(chǎn)品不含有上述病毒。
3） 雌三醇酶聯(lián)結(jié)物，14m，內(nèi)裝有辣根過氧化物酶標記的雌三醇。
4） TMB底物液，14ml。
5） 終止液，14ml，H2SO4.。
6） 濃縮洗滌液（40X），30ml。
注意：試劑盒中可能含有像人血清一樣需進行特殊處理的材料。在處理剩余材料前，注意查看當?shù)仃P(guān)于處理醫(yī)學(xué)垃圾的法規(guī)，以確保處理方法及結(jié)果能滿足當?shù)胤梢?guī)范的要求。
4、實驗所虛材料（但試劑盒不提供）
1）標準移液器
2）可在450nm處讀數(shù)的酶標儀
3）吸水紙
5、樣品的采集與處理
1） 把所有的血液和血清當作潛在的乙肝病毒和HIV傳染源進行處理。
2） 在E3的檢測過程中需要用血清。
3） 采集到血液后立即分離血清，儲存時用蓋子蓋好。
4） 樣品可在2-8℃的環(huán)境下存放4天，如果想將存放時間超過4天，則必須凍存。
5） 樣品要避免反復(fù)凍融。
6） 實驗開始前，必須將凍存的血清充分解凍并混合均勻。
7） 不要使用含脂量很高的血清。（實驗開始前必須試圖檢測下血清的含脂量）。
8） 含一定量脂血、溶血和黃疸血的樣品一般不會影響實驗結(jié)果。
6、洗滌液的準備
用900ml蒸餾水稀釋濃縮洗滌液，貯存于2-8℃的環(huán)境下時，在有效期內(nèi)穩(wěn)定。
7、實驗步驟
1） 將10μl雌三醇標準品加入到相應(yīng)微孔中。
2） 將質(zhì)控品和病人血清分別10 μl加入到相應(yīng)微孔中。
3） 在每一微孔中加入100μl酶標記的雌三醇。
4） 10秒鐘充分混勻。
5） 室溫溫育60分鐘。
6） 棄去孔內(nèi)反應(yīng)液，每孔用400μL洗滌液洗板4次，并在吸水紙上拍干。
7） 在每一微孔中加入100μl TMB底物液。
8） 室溫溫育30分鐘。
9） 在每一微孔中加入100μl終止液。
10） 在450±10nm處讀取OD值。
8、實驗注意事項
1） 加試劑時，保證每孔的加樣順序一致，這可以保證所有的孔都有相同的溫育時間。每一加樣步驟都應(yīng)無中斷。
2） 為了避免液體殘留在孔壁上，請將試劑直接加入到微孔底部。
3） 為了能得到理想的實驗結(jié)果，我們檢測標準品和樣品都做雙份檢測。
4） 實驗所用的移液器包括多道或自動移液器的CV（變異系數(shù)）都必須低于1%。
9、結(jié)果
9.1手工計算
1）在半對數(shù)坐標紙上，以E3標準品的OD值為Y軸，其濃度為X軸作一條標準曲線。
2）在點之間畫一條的曲線
3）在標準曲線上，用質(zhì)控品和未知血清樣品的OD值標繪出其相應(yīng)的濃度，并記錄下結(jié)果
DRG公司的MAT3000酶標儀及相應(yīng)的線形回歸曲線可用計算機輔助的四參數(shù)和三次回歸曲線來直接讀取OD 值。
10、操作局限性
試劑盒的使用者必須在實驗開始前閱讀并充分理解說明書。嚴格遵守實驗操作才可以獲得可靠的實驗結(jié)果。處理、儲存、添加試劑時要特別小心，這對于實驗結(jié)果的性和精密性具有重要意義。病人樣品的不正當處理可能會導(dǎo)致錯誤的實驗結(jié)果。實驗開始前，請將凍融的樣品充分混合均勻。請勿使用陳舊的和處理錯誤的血清樣品。樣品降解及反復(fù)凍融都會導(dǎo)致錯誤的實驗結(jié)果。病人樣品應(yīng)當盡早檢測。嚴重溶血、脂血或黃疸血的樣品會使得實驗結(jié)果的精密度和度都比較低。使用這種樣品所獲得的實驗結(jié)果應(yīng)當小心處理。實驗這應(yīng)當使用質(zhì)量更好的樣品來確定結(jié)果。
11、實驗質(zhì)控說明
1）不同試劑盒或不同批次的試劑請勿混合或交換。
2）請勿使用過期試劑。（有效期印在試劑瓶上）
3）每個實驗室都應(yīng)當在正常范圍、低水平范圍和高水平范圍內(nèi)，用質(zhì)控確定自己實驗室的精密讀和度標準。
4）為了保證不同批次試劑盒結(jié)果的可靠性和連續(xù)性，繪圖方式和統(tǒng)計方法都應(yīng)不斷更新。
12、臨床意義
人體體液E3的檢測常被用來監(jiān)測胎兒是否生長正常，特別是檢測那些高危產(chǎn)婦。血漿E3的濃度在妊娠20周內(nèi)會逐漸增加，在晚孕期會增加得更快。因為血清E3的正常與不正常范圍相當寬而且不穩(wěn)定，所以單獨檢測E3沒有很大的臨床意義。為了確定個體E3的趨向，我們應(yīng)當經(jīng)常監(jiān)測病人的情況。晚孕期血清E3濃度繼續(xù)較低或突然并持續(xù)降低，表明胎兒窘迫或子宮死胎的可能性很高。如果出現(xiàn)這種情況，應(yīng)當用相應(yīng)的方法檢測胎兒的情況如何。血清游離E3的水平殷鋼結(jié)果其它臨床方法或診斷方法（羊膜穿刺和超聲波）來說明其臨床意義。在下列病人的血清中也可能檢測到不正常的E3水平：注射了抗生素或皮質(zhì)甾體類激素的病人和母體肝功能削弱的病人。
13、期望值
| 孕周 | 參考范圍（ng/ml） | 孕周 | 參考范圍（ng/ml） | 雙胎妊娠（ng/ml |
| 12 | 0.3-1.0 | 22-23 | 2.7-16 | 3-18 |
| 13 | 0.3-11 | 24-25 | 2.9-17 | 3-20 |
| 14 | 1.4-1.6 | 26-27 | 3.0-18 | 4-21 |
| 15 | 1.0-4.4 | 28-29 | 3.2-20 | 4-22 |
| 16 | 1.4-6.5 | 30-31 | 3.6-22 | 5-25 |
| 17 | 1.5-6.6 | 32-33 | 4.6-23 | 6-39 |
| 18 | 1.6-8.5 | 34-35 | 5.1-25 | 7-39 |
| 19 | 1.9-11 | 36-37 | 7.2-29 | 9-38 |
| 20 | 2.1-13 | 38-39 | 7.8-37 | 13-40 |
| 21 | 2.6-14 | 40-42 | 8.0-39 | -- -- |
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