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恒遠生物|原代細胞培養(yǎng)的應(yīng)用以及注意事項

來源:上海恒遠生物科技有限公司   2023年09月26日 09:42  

一、原代細胞培養(yǎng)的應(yīng)用


1.為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段;


2.為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件;


3.服務(wù)于臨床實踐,用于藥物篩選等。


二、原代細胞培養(yǎng)的分離注意事項


1、組織塊培養(yǎng)法


1)組織塊接種后的前3天,在觀察和移動的過程中,注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動和振動,否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會脫落飄起。


2)加入的培養(yǎng)液不宜過多,避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。


3)當(dāng)細胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞,它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細胞的生長。


4)為促進組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上,可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。


2、貼壁型原代細胞


1)原代培養(yǎng)的分離細胞在初次接觸體外環(huán)境時,它們之間會互相影響,在這些細胞之間能產(chǎn)生一些促生長的活性物質(zhì),使細胞彼此互相促進存活和生長。如果接種的細胞密度過低,細胞之間的促生長作用很小,也很難使細胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進入獨立生存環(huán)境的變化過程。如果接種的細胞密度過大,會導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足,代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。


2)適當(dāng)增大原代培養(yǎng)接種的細胞密度,給培養(yǎng)的細胞提供更多類似于在體內(nèi)時細胞之間的相互作用,會極大提高原代培養(yǎng)的細胞在體外存活率。待細胞適應(yīng)體外環(huán)境后進行傳代培養(yǎng)時再以較低的密度接種和培養(yǎng)。


3)盡快使接種的細胞貼壁,是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵??梢栽诮臃N后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3小時到5小時,待細胞貼壁后,再補足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。


3、懸浮型原代細胞


1)必須保持細胞的懸浮狀態(tài),可以通過增加培養(yǎng)液的黏度來幫助細胞呈懸浮狀態(tài),如給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復(fù)合物。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液,以5ml為zui低限度,否則攪拌時會產(chǎn)生氣泡對細胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快,否則即可使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下,可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng),給懸浮培養(yǎng)的細胞換液時要注意不要吸出細胞。


2)能夠進行懸浮培養(yǎng)的細胞,其生命力一般都比較旺盛,體外分裂增殖的速度較快,營養(yǎng)成分消耗大,換液時間隔一般較短。

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