紅色熒光蛋白HcRed1(應(yīng)用于亞細(xì)胞標(biāo)記)
紅色熒光蛋白HcRed1(應(yīng)用于亞細(xì)胞標(biāo)記)
HcRed1是從紫點(diǎn)海葵Heteractis crispa分離出來(lái)的,已經(jīng)商業(yè)化應(yīng)用。HcRed1來(lái)自于通過(guò)突變改造可以吸收紅光的非熒光生色蛋白,改造后可以產(chǎn)生微弱的熒光二聚體,最大吸收值在588nm,最大發(fā)射光為618nm。雖然這個(gè)蛋白的熒光發(fā)射譜可以與DsRed分開(kāi),但是它易于跟DsRed共凝集,亮度也不夠。將兩個(gè)分子縱列起來(lái)改造HcRed原則上可以克服二聚化,但是兩個(gè)分子配對(duì)更易于產(chǎn)生單體標(biāo)簽。
較為常用的熒光蛋白是綠色熒光蛋白(GFP)。將GFP編碼序列與目的蛋白編碼序列融合構(gòu)成融合基因后,通過(guò)基因槍法、顯微注射法、電轉(zhuǎn)化等細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù),轉(zhuǎn)染合適的細(xì)胞。利用目的基因的基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制,如啟動(dòng)子和信號(hào)序列來(lái)調(diào)控融合基因的表達(dá),通過(guò)熒光顯微鏡觀察GFP在組織或亞細(xì)胞中的分布即可確定目的蛋白在細(xì)胞中的定位。
目的基因與GFP基因的融合有兩種方式∶①GFP位于目的基因后面,即目的基因-GFP;②GFP位于目的基因前面,即GFP-目的基因。構(gòu)建方式的選擇要視具體蛋白具體分析,不能影響目的蛋白的定位和功能。
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以上資料來(lái)自小編MSQ,2023.09.28
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